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目的:1.通过检测EZH2(enhancer of zeste homolog 2)在舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)细胞系和舌癌组织标本中的表达,结合临床数据和随访资料,评价EZH2表达水平与临床参数和治疗预后的相关性。2.通过化学药物抑制剂DZNep(3- Deazaneplanocin A)干预及siRNA技术抑制EZH2,观察其表达降低后对舌鳞癌细胞表型的影响(迁移、侵袭、增殖与凋亡)。
方法:应用免疫组织化学染色方法检测EZH2在舌鳞癌组织及正常舌体组织巾的表达,应用免疫荧光细胞染色方法检测EZH2在舌鳞癌细胞系Tca8113,SCC9,SCC25中的表达和定位。应用Western Blot和Real-time PCR方法检测EZH2在正常舌体组织、舌鳞癌组织及细胞系Tca8113,SCC9,SCC25中的表达,检测化学抑制剂DZNep lT预和EZH2-siRNA体外细胞转染后EZH2的表达变化,并还测定抑制EZH2表达后,舌鳞癌细胞系Tca8113的迁移能力、侵袭性、增殖及凋亡的变化。
结果:免疫组织化学染色结果显示:52例舌鳞状细胞癌组织和12例舌正常豁膜组织中EZH2的表达有显著差异(P<0.001)052例舌鳞状细胞癌患者中EZH2表达与肿瘤病理学分级(P=0.033)、颈淋巴结转移(P=0.036)、局部侵润性(P=0.012)有关,而与患者性别、年龄、肿瘤大小、临床分期无关(P<0.05)。结合临床随访资料,对患者总体生存情况进行分析,发现EZH2高表达组患者的总体生存率明显低于低表达组患者(P=0.028)。细胞免疫荧光染色、Western Blot和Real-time PCR显示:舌鳞癌细胞系及舌鳞癌组织中EZH2表达水平明显高于正常舌体组织。加人化学药物抑制剂DZNep或EZH2 siRNA体外转染后显著降低了EZH2在舌鳞癌细胞系Tca8113中的表达。划痕实验、Transwell细胞侵袭实验、MTT及流式细胞仪技术显示:DZNep处理及siRNA干扰后表达降低抑制了舌鳞癌细胞的迁移、侵袭性及增殖能力,并促进其凋亡。
结论:EZH2在舌鳞状细胞癌组织及细胞中表达增高,并与肿瘤病理学分级、颈淋巴结转移、局部侵润性及患者总体生存率显著相关,提示EZH2的异常表达可能与舌癌的发生发展有关EZH2可能是舌癌的潜在分子标记物。