目的：为研制出更加安全并保持良好免疫原性的弱毒株及疫苗活载体. 材料与方法：通过重组自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,将已经缺失cya基因的鼠伤寒沙门氏菌SL1344株进一步缺失crp基因,构建鼠伤寒沙门氏菌SL1344株的crp/cya双基因缺失突变株.以转化了重组自杀性质粒pREΔcrp的大肠杆菌x7213为供体菌,SL1344Δcya为受体菌进行接合转移,两步法筛选crp/cya基因双缺失突变株,并对其表型、遗传稳定性、生长特性、毒力等生物学特性进行鉴定,同时与野生株SL1344、单缺失株SL1344Δcrp及亲本株SL1344Δcya的生物学特性进行系统的对比研究. 结果与结论：PCR和测序鉴定结果表明双缺失株构建成功。经对该菌株的生物学特性进行研究发现，SL1 344AcrpAcya的血清型与单缺失株SL1344△crp、亲本株SL1344△Acya及野生株SL1344保持一致，且能够稳定遗传缺失后的crp基因；其生化特性与亲本株基本相近，但与野毒株相比发生明显变化，生长速度也更为缓慢；雏鸡毒力测定试验显示，双缺失株毒力较两个单缺失株降低了约100倍，较SL1344至少降低了约106倍。由于常规灭活疫苗产生的保护水平低且持续时间短，一直以来其效果都饱受争议。近年来通过基因工程方法构建减毒沙门氏菌作为口服疫苗及其作为疫苗活载体表达外源抗原受到了极大的关注。国内外已经成功构建多株毒力基因突变的减毒沙门氏菌作为口服活疫苗及疫苗载体的候选菌株。cya和crp基因编码的蛋白具有多种调节功能，包括碳水化合物及氨基酸的利用，细菌代谢过程中某些基因的转录，营养物质的运送和分解，一些氨基酸渗透酶的合成，鞭毛、菌毛的合成，外膜蛋白的合成以及多种基因表达等。crp与cya基因的突变势必影响菌体的正常代谢速率、生理合成功能及多种基因的表达等，从而降低毒力。本研究利用重组自杀性质粒构建鼠伤寒沙门氏菌SL1344△Acrp△Acya双缺失株，并系统研究对比了其生物学特性，为研制更加安全有效的鼠伤寒沙门氏菌疫苗及其疫苗载体奠定了基础。