论文部分内容阅读
目的:观察新生大鼠镉暴露后,卵巢卵泡形态与功能的变化,了解镉对卵泡发育基因SCF/C-KIT的表达及其DNA甲基化模式的变化情况,探讨镉暴露对新生大鼠卵巢发育的影响及SCF/C-KIT在此过程中的作用.方法:4日龄SD大鼠卵巢体外培养,染镉(0、0.5、5、10、50μM)4天.光学显微镜下计数各级卵泡数量、测量卵母细胞直径;免疫组织化学方法检测颗粒细胞PCNA蛋白表达情况;用RIA/ELISA方法检测培养液中E2、P4含量;RT-PCR检测SCF和C-KIT的mRNA水平;Western-blot法检测两者蛋白水平;提取卵巢全基因组DNA,经重亚硫酸盐处理后,结合碱基特异性酶切反应和MALDI-TOF-MS检测原理,分析SCF/C-KIT基因启动子区DNA甲基化情况.结果:1.镉对卵巢卵泡构成比、卵母细胞直径、颗粒细胞增殖及激素分泌的影响:(1)卵泡构成比:与对照组相比,10μM组原始卵泡构成比升高(P<0.05);其余各组原始卵泡构成比均无明显变化(P>0.05);(2)卵母细胞直径:与对照组相比,0.5μM组原始卵泡和生长卵泡中卵母细胞直径明显增大(P<0.01);5μM组生长卵泡中卵母细胞直径增大(P<0.05),而原始卵泡卵母细胞直径无明显差异(P>0.05);10μM组原始卵泡和生长卵泡中卵母细胞直径则显著减小(P<0.01);(3)PCNA阳性率:与对照组相比,除0.5μM组的卵巢颗粒细胞PCNA阳性率显著增加(P<0.01)外,其他各剂量组显著减少(P<0.01);(4)E 2、P4水平:与对照组相比,除10μM、50μM组培养液中E2水平明显降低(分别为P<0.05,P<0.01)外,余无明显变化.2.镉对卵巢表达SCF/C-KIT的影响:与对照组相比,SCF、C-KIT的mRNA及蛋白表达水平在0.5μM组显著升高(P<0.01),在10μM、50μM组则显著降低(P<0.01).3.镉对卵巢表达SCF/C-KIT基因启动子区DNA甲基化模式的影响:各个剂量组SCF、C-KIT基因启动子区CpG岛呈低甲基化状态,但与对照组比较,各组间的总甲基化率无明显差异(P>0.05).结论:新生大鼠卵巢镉暴露后,可引起原始卵泡生长发育障碍,雌激素分泌异常,卵巢SCF/C-KIT mRNA和蛋白表达下调,但SCF/C-KIT基因启动子区未出现DNA甲基化模式的改变,尚不能排除与卵泡生长发育相关的其他基因的DNA甲基化模式的变化在镉致卵泡发育毒性中起作用.