SCF/C-KIT在新生大鼠卵巢镉暴露致原始卵泡发育障碍中的作用

来源 :中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会学术会议暨环境内分泌干扰物的毒理学研究新技术新方法研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xueyanli122
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  目的:观察新生大鼠镉暴露后,卵巢卵泡形态与功能的变化,了解镉对卵泡发育基因SCF/C-KIT的表达及其DNA甲基化模式的变化情况,探讨镉暴露对新生大鼠卵巢发育的影响及SCF/C-KIT在此过程中的作用.方法:4日龄SD大鼠卵巢体外培养,染镉(0、0.5、5、10、50μM)4天.光学显微镜下计数各级卵泡数量、测量卵母细胞直径;免疫组织化学方法检测颗粒细胞PCNA蛋白表达情况;用RIA/ELISA方法检测培养液中E2、P4含量;RT-PCR检测SCF和C-KIT的mRNA水平;Western-blot法检测两者蛋白水平;提取卵巢全基因组DNA,经重亚硫酸盐处理后,结合碱基特异性酶切反应和MALDI-TOF-MS检测原理,分析SCF/C-KIT基因启动子区DNA甲基化情况.结果:1.镉对卵巢卵泡构成比、卵母细胞直径、颗粒细胞增殖及激素分泌的影响:(1)卵泡构成比:与对照组相比,10μM组原始卵泡构成比升高(P<0.05);其余各组原始卵泡构成比均无明显变化(P>0.05);(2)卵母细胞直径:与对照组相比,0.5μM组原始卵泡和生长卵泡中卵母细胞直径明显增大(P<0.01);5μM组生长卵泡中卵母细胞直径增大(P<0.05),而原始卵泡卵母细胞直径无明显差异(P>0.05);10μM组原始卵泡和生长卵泡中卵母细胞直径则显著减小(P<0.01);(3)PCNA阳性率:与对照组相比,除0.5μM组的卵巢颗粒细胞PCNA阳性率显著增加(P<0.01)外,其他各剂量组显著减少(P<0.01);(4)E 2、P4水平:与对照组相比,除10μM、50μM组培养液中E2水平明显降低(分别为P<0.05,P<0.01)外,余无明显变化.2.镉对卵巢表达SCF/C-KIT的影响:与对照组相比,SCF、C-KIT的mRNA及蛋白表达水平在0.5μM组显著升高(P<0.01),在10μM、50μM组则显著降低(P<0.01).3.镉对卵巢表达SCF/C-KIT基因启动子区DNA甲基化模式的影响:各个剂量组SCF、C-KIT基因启动子区CpG岛呈低甲基化状态,但与对照组比较,各组间的总甲基化率无明显差异(P>0.05).结论:新生大鼠卵巢镉暴露后,可引起原始卵泡生长发育障碍,雌激素分泌异常,卵巢SCF/C-KIT mRNA和蛋白表达下调,但SCF/C-KIT基因启动子区未出现DNA甲基化模式的改变,尚不能排除与卵泡生长发育相关的其他基因的DNA甲基化模式的变化在镉致卵泡发育毒性中起作用.
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