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目的:
通过比较不同证候食管癌病人和健康对照血清差异蛋白表达谱,筛选不同证候食管癌血清差异蛋白并建立食管癌证候相关诊断模型,探讨其在食管癌中医辨证诊断中的意义,为食管癌证候分子诊断提供可参考的依据.
方法:
运用磁珠与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱相结合蛋白组学技术,对不同证候食管癌患者和健康对照血清做质谱检测分析,筛选出各证候组与健康对照组比较血清差异表达蛋白峰,并对筛选出的差异蛋白用MASCOT进行数据库检索和鉴定;以食管癌各证候组和健康对照组筛选出的各证候差异表达显著的蛋白峰建立证候相关蛋白组诊断模型,以新的样本对各证候筛选出的差异蛋白进行盲法验证,进一步确定筛选出的各证候血清差异蛋白.
结果:
(1)食管癌各证候组与健康对照组血清差异蛋白质谱检测分析,分别得出瘀血内结11个、津亏热结组12个、气虚阳微组14个、痰气交阻组13个显著差异表达蛋白峰.
(2)分别以各证候组和健康对照组筛选出的有显著差异表达的蛋白峰建立各证候食管癌蛋白指纹图谱诊断模型,用新的样本进行盲法验证,结果显示,各证候组诊断模型特异性≥80%、准确性>85%.
(3)将上述各差异表达显著的蛋白质峰运用MASCOT进行蛋白数据库搜索,得出显著低表达的质荷比峰为2883的多肽为一种假定蛋白,名称为线粒体胞苷一磷酸激酶2 (CMPK2),相对分子质量为2672 Da.
结论:
(1)通过磁珠和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术相结合的蛋白组学分析,得出了不同证候食管癌显著差异表达蛋白峰,并鉴定出质荷比峰为2883的蛋白为CMPK2蛋白,在B组和F组中显著高表达.
(2)用新的样本并增加样本数量,对各证候组和健康对照组比较筛选出的有显著差异表达的血清多肽蛋白质谱峰建立各证候食管癌蛋白指纹图谱诊断模型,进行盲法验证,有较好的特异性和较高的准确性,筛选出的食管癌各证候血清多肽差异蛋白在食管癌中医辨证诊断中具有重要意义,可以作为食管癌蛋白指纹图谱的辅助诊断.