空间环境对肺炎克雷伯菌的影响及机制研究

来源 :中国空间科学学会空间生命专业委员会第二十届学术研讨会暨中国宇航学会航天医学工程与空间生物学专业委员会第四届学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hyz012
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  目的:空间环境具备失重、高真空、微磁场和粒子辐射等特点,能够影响微生物的生物学形态和表型改变.本研究借助神舟八号飞船,搭载了肺炎克雷伯菌进入太空进行实验.对回收的肺炎克雷伯菌进行形态学以及比较基因组学的研究,以期发现经过空间飞行后肺炎克雷伯菌的变化及其机制.方法:对返回地面的肺炎克雷伯菌株进行16s测序鉴定菌株.革兰氏染色,光镜下观察肺炎克雷伯菌形态学变化.对空间飞行肺炎克雷伯菌株和地面对照株进行生长曲线的测定.使用纸片法对肺炎克雷伯菌进行青霉素G、氨苄青霉素、头孢唑林、头孢他啶、头孢三嗪、阿奇霉素、环丙沙星、林可霉素、万古霉素、复方新诺明、氯霉素、舒普深、丁胺卡那、链霉素、美满霉素、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦等1 7种抗生素耐药性检测.同时为检测肺炎克雷伯菌毒力的变化进行溶血检试验.用Biolog的方法对肺炎克雷伯菌的生化代谢谱进行检测.采用高通量Illumina测序技术对地面对照组LCT-KP214,空间飞行菌株LCT-KP 182和LCT-KP289样品的DNA进行90bp的Paired-End测序.对产出的数据进行De novo组装.对测序得到的基因进行基因预测及注释分析.并对空间飞行肺炎克雷伯菌株和地面对照菌株进行比较基因组学分析,包括进化分析、共线性及重排分析、质粒鉴定及差异分析、SNP分析及注释、InDel差异分析及注释、Core Pan分析等.结果:空间飞行肺炎克雷伯菌株LCT-KP 182和LCT-KP289与对照组LCT-KP214相比较,在形态学上没有明显的变化;同样细菌的生长曲线在经过空间飞行后也没有明显的变化.经过空间飞行后肺炎克雷伯菌对头孢唑林、头孢他啶和复方新诺明的耐药性增强.溶血实验显示,空间飞行肺炎克雷伯菌株LCT-KP 182具有明显的溶血环,而地面对照株LCT-KP214和另一株空间飞行菌株LCT-KP289没有出现明显的溶血改变.Biology生化代谢谱提示LCT-KP182与地面对照组LCT-KP214相比较,在夫西地酸、D-丝氨酸、醋竹桃霉素、米诺环素、林可霉素、盐酸胍、Niaproof4、万古霉素、四氮唑紫、四氮唑蓝等相关代谢上有差别;LCT-KP289与地面对照组LCT-KP214相比较,在D-海藻糖、N-乙酰神经氨酸、D-甘露醇、肌醇、粘液酸、D型砂糖、α-酮戊二酸等相关代谢上有差别.比较基因组学共线性分析显示经过空间飞行后肺炎克雷伯菌的基因组没有发生明显的变化.SNP分析显示,空间飞行肺炎克雷伯菌LCT-KP 182具有13个SNP位点,LCT-KP289具有73个SNP位点,而且这些位点大都是杂合的多态性位点.而InDel分析显示经过空间飞行后肺炎克雷伯菌的基因组并没有发生基因的插入和缺失突变.质粒鉴定及差异分析显示空间飞行肺炎克雷伯菌LCT-KP 182和LCT-KP289的序列片段C3485是具有环化关系的质粒,其测序深度与地面对照株LCT-KP214相比存在差异,即与LCT-KP214相比,这个质粒在LCT-KP 182中的拷贝数明显增加了约一倍,而在LCT-KP289中的拷贝数又明显减少了约二分之一.比较基因组学分析,空间飞行菌株LCT-KP 182与地面对照菌株LCT-KP214比较,有138个基因上调,344个基因下调,GO功能富集分析显示这些差异表达基因与碳水化合物运输相关;空间飞行菌株LCT-KP289与地面对照菌株LCT-KP214比较,有436个基因上调,2027个基因下调,GO功能富集分析显示这些基因与细菌细胞定位和转运相关;两个空间飞行株LCT-KP 182和LCT-KP289比较提示两株突变株在糖的转运活性方面存在不同.在LCT-KP289菌株中,我们发现了30个耐药基因,而地面对照LCT-KP214菌株发现了20个耐药基因.进一步发现LCT-KP289磺胺耐药性增加可能与sul1基因的调控改变有关.结论:本研究揭示了空间环境可以使肺炎克雷伯氏菌生物学性状和基因组、转录组发生改变.这些数据对将来空间环境对微生物的影响研究具有重要的参考意义.
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