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目的:本实验利用P.gingivalis感染巨噬细胞所释放的外泌体刺激小鼠成骨细胞系MC3T3-E1,观察该外泌体能否影响MC3T3-E1细胞增殖、凋亡和成骨,探索了一种新的P.gingivalis感染引发牙周骨代谢失调的途径。研究方法:1.PMA诱导U937细胞为巨噬细胞,ExoQuick试剂盒法提取未受到P.gingivalis感染和受到P.gingivalis感染(MOI=100)的巨噬细胞所释放的外泌体,表示为外泌体EXO-N和EXO-P,利用电镜、NTA、Western blot鉴定外泌体EXO-N和EXO-P。2.用外泌体EXO-N和EXO-P刺激MC3T3-E1细胞,免疫荧光检测MC3T3-E1细胞能否摄取PKH67绿色荧光染料标记的外泌体;CCK-8法检测MC3T3-E1细胞增殖;细胞周期检测试剂盒检测MC3T3-E1细胞周期;Annexin V-FITC、PI双染法检测MC3T3-E1细胞凋亡;实时定量PCR和Western blot检测MC3T3-E1细胞ALP、RUNX2、RANKL、OPG基因和蛋白表达的变化。结果:1.P.gingivalis感染的巨噬细胞和未受P.gingivalis感染的巨噬细胞均可以释放外泌体,外泌体鉴定结果无明显差异,透射电子显微镜下可见外泌体EXO-N和EXO-P均成类盘形的囊泡状结构,NTA鉴定外泌体的直径在105.4～136.4 nm之间,Western blot结果显示外泌体标志蛋白CD63阳性表达。2.外泌体EXO-N和EXO-P与MC3T3-E1细胞共培养24 h,免疫荧光显微镜可观察到MC3T3-E1细胞内有被PKH67标记的外泌体EXO-N和EXO-P的绿色荧光信号;EXO-P组MC3T3-E1细胞的增殖率降低,凋亡率增加,G1期缩短,S期延长,RANKL基因和蛋白表达上升,ALP、OPG、RUNX2基因和蛋白表达下降,而EXO-N组以上指标均无明显变化。结论:P.gingivalis感染巨噬细胞所释放的外泌体可以抑制成骨细胞增殖,促进成骨细胞凋亡,减弱成骨细胞的成骨能力,这可能是P.gingivalis感染引发牙周代谢失调的新途径。