【摘 要】
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本研究通过鸡胚接种分离到3株猪流感病毒,经HI、RT-PCR鉴定,其中GXHZ株为H1N2亚型毒株,GXLZ、GXXY株为H3N2亚型毒株,并对分离株进行EID50测定及GXHZ株的猪体攻毒试验。所扩增分离到3株SIV病毒NA基因与A/Sw/Hainan/1/2005(H1N2)的核苷酸和氨基酸序列同源性最高。三株SIV分离株的NA基因在氨基端胞浆尾区均由K6-R6,在非极性跨膜区均由V20-M2
【机 构】
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广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530005 广西兽医研究所,广西南宁 530001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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本研究通过鸡胚接种分离到3株猪流感病毒,经HI、RT-PCR鉴定,其中GXHZ株为H1N2亚型毒株,GXLZ、GXXY株为H3N2亚型毒株,并对分离株进行EID50测定及GXHZ株的猪体攻毒试验。所扩增分离到3株SIV病毒NA基因与A/Sw/Hainan/1/2005(H1N2)的核苷酸和氨基酸序列同源性最高。三株SIV分离株的NA基因在氨基端胞浆尾区均由K6-R6,在非极性跨膜区均由V20-M20。系统发育分析表明本实验所分离的三个STV毒株与H1N2亚型毒株亲缘性最相近,且来源于猪源H1N2亚型流感病毒。从时间上也发现,三个分离株的NA基因与1996年以后获得的H3N2毒株亲缘关系很近,都隶属于一个亚分支。
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本研究以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,以来源于非结构蛋白3ABC和结构蛋白VP4上的3个Th2细胞表位基因作为辅助基因,构建了O型、A型和Asia1型FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT,在此基础上,以SEA为基因佐剂,通过分子设计构建了SEA与OAAT融合表达基因。将构建好的表达盒OA
通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经E.caRV和xba I双酶切后连接构建真核表达质粒pVAX Ⅰ-P1-2A,将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测.再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验,结果酶切结果与预期目的条带大
为构建既具有凝集性又具有抗原性的双功能融合蛋白,本研究利用特异性引物从重组质粒PMD-2E8SCFv和PMD-gE中PCR扩增得2E8基因(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和kgE基因(PRVgE主要抗原编码区),采用重叠延伸(SOE)PCR法拼接成融合的双功能分子2E8kgE,经BamHI和EcoRI双酶切处理,纯化后,克隆至BamHI和EcoRI双酶切处理的表达载体pET-Trx中,构建了原核表
根据GenBank中猪细小病毒PPV NADL-2株NS1序列设计了一对引物,以本课题组保存的PPVS-1分离株不同传代代次的DNA为模板,进行PCR扩增,将扩增产物分别克隆到pGEM-T载体中进行测序。结果表明,扩增片段长约2.2kb,包含完整的NS1基因,共编码662个氨基酸。应用DNAStar软件进行序列分析,结果显示所有代次的Ns1核苷酸同源性在99.4％以上,氨基酸同源性在98.5％以上
观察不同温度对猪细小病毒N株血凝活性的影响,结果表明,猪细小病毒N株在37"C条件下十分稳定,作用28d血凝滴度变化不大,只下降1-3个滴度;在60℃恒温水浴下的血凝滴度变化缓慢,血凝滴度在前7d-直稳定;随着温度的升高,病毒血凝的稳定性迅速降低,短时间内即可失去血凝活性,在75℃ 1h、80℃ 10min、85℃ 5min,检测不出病毒血凝活性。由此证明,猪细小病毒N株在37、60℃时血凝活性十
流感病毒M2蛋白五个关键位点氨基酸残基(第26、27、30、31和34位)中的任何一个发生突变会导致抗流感病毒药物中金刚烷胺抗药性的产生。本研究利用焦磷酸测序技术对2004年-2008年国内分离的10株猪流感病毒进行了鉴定,并初步进行了抗药性分析。结果表明基于M2蛋白基因保守区序列建立的焦磷酸测序技术能用于国内猪流感病毒的快速检测,且具有较好的特异性和重复性。抗药性分析表明10株猪流感病毒国内分离
应用间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪瘟抗体,IHA试验以1：16为判定孔,抗体效价大于或等于1：16为抗体阳性;ELISA试验以抗体阻断率40％为判定标准,阻断率大于或等于40％为抗体阳性,同步检测了122份规模化猪场不同阶段猪血清,结果ELISA检测抗体阳性率比IHA检测抗体阳性率低,阴性、阳性相符的血清数为92,相关性为75.4％,不同抗体水平分布的血清数也不同,个
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应用猪O型口蹄疫合成肽疫苗、猪O型口蹄疫灭活疫苗两种疫苗分别免疫仔猪,观察疫苗反应情况,经口蹄疫O型液相阻断ELISA和猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白ELISA交叉检测,确定两种疫苗的免疫效果,比较两种实验方法。结果显示猪O型合成肽疫苗免疫转阳率高于猪O型口蹄疫灭活疫苗,口蹄疫O型液相阻断ELISA不适合检测猪O型合成肽疫苗免疫抗体。
目前,我国口蹄疫疫苗生产和检验依然采用乳鼠测毒法,经生产实践证明该检验方法较为繁琐,费时费力,严重影响了检验效率。本实验室前两年用正常的BHK-21细胞测定TCID50,结果由于普通BHK-21细胞在达到判定时间的时候,大量细胞已老化脱落,造成后期染色结果不准确,与乳鼠测毒法结果差异较大。后来又引进了转化BHK-21细胞,专用于检测口蹄疫病毒,经试验证明与乳鼠测毒法取得了较为一致的检验结果,经证明