【摘 要】
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目的 腺相关病毒载体插入Tet-Off反式激活因子,达到可人为调控下游受控基因的表达,避免过度表达或重组对宿主产生危害的可能.方法 以pUHrT61-tTA2s和pTRE-d2EGFP为模板,
【机 构】
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山东大学齐鲁医院神经外科 250012
【出 处】
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中华医学会神经外科学分会第九次学术会议
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目的 腺相关病毒载体插入Tet-Off反式激活因子,达到可人为调控下游受控基因的表达,避免过度表达或重组对宿主产生危害的可能.方法 以pUHrT61-tTA2s和pTRE-d2EGFP为模板,引物5端插入酶切位点,PCR扩增亚克隆所需片断后插入pCRn-TOPO.AAV前病毒质粒插入寡核苷酸序列,通过相应酶切位点将PCR扩增部分插入AAV前病毒质粒,磷酸钙沉降法与辅助质粒共同导入HEK 293细胞内扩增完成rAAV载体的合成、包装.细胞裂解后经氯化铯梯度离心法分离、半透膜纯化病毒载体,实时定量PCR(RQ-PCR)检测病毒效价.rAAV以1×105 vgc/cell感染HEK293细胞,培养液加入不同浓度强力霉素,检测对d2EGFP表达的抑制作用.
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