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目的:探讨人脐带源Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞对表达FOXP3的异基因T淋巴细胞表型的影响。方法: 1．人脐带源Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞的获得:取新鲜无菌脐带标本,去掉周围结缔组织,用D—Hank’s液至少冲洗两次后,剪成小块,0．1％胶原酶37℃消化45min,0．125％的胰酶继续消化45min后,加入适量的血清终止胰酶的作用, 用70 μm滤网过滤。1500rpm离心10min,收集细胞,接种在经fibronectin包被的25cm2的培养瓶内,在含5％的CO2、 37℃培养箱内孵育、扩增,第三天弃去悬浮细胞,贴壁细胞继续培养6天左右,待细胞融合约达75％时,用0．125％的胰酶消化并以1:3比例传代扩增。待细胞达适当数量后,用CD45 及GlyA磁珠分选去除CD45+及GlyA+细胞后,将阴性选择所得细胞接种在96孔细胞培养板中(每孔1个细胞),96孔板预先以ECM胶(含5 ng／mL BMP-4,30 ng／mL SCF及 3％FCS)铺板,20天后,挑取单克隆细胞,扩增备用;2．不同T细胞亚群的获得及间充质干细胞对其免疫表型的影响: 应用尼龙毛柱分离T淋巴细胞,再经CD8或CD4磁珠分选出CD8+或CD4+T淋巴细胞亚群;PCR方法分别检测其 FOXP3的表达情况, 用植物血凝素(PHA)刺激与或未与 FMSCs共培养3天的CD8+T细胞或CD4+T淋巴细胞,应用MTT法测定T细胞的增殖;应用流式细胞术分别检测与或未与MSC共培养8天的CD8+T淋巴细胞或CD4+T淋巴细胞亚群的变化及用PHA刺激与或未与FMSCs共培养3天的CD8+T或CD4+T淋巴细胞亚群免疫表型的变化;采用 PCR分别检测FOXP3+在CD25+、CD4+CD25+、CD8+及 CD8+CD28各个T细胞亚群中的表达情况,结果:人脐带源 Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞能显著抑制PHA刺激引起的CD8+T细胞的增殖,且这种抑制作用是剂量依赖性的;流式细胞术检测结果显示,与未经人脐带Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞处理的CD8+T淋巴细胞相比,Flk1+CD31-CD34- 间充质干细胞显著上调共培养8天的CD8+T细胞中的CD8+ CD28-亚群,及经PHA作用3天后的CD8+T淋巴细胞中的CD8+CD28-亚群, 与未经Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞处理的CD4+T淋巴细胞相比,人脐带源Flk1+CD31- CD34-间充质干细胞显著上调共培养8天的CD4+T淋巴细胞中的CD4+CD25+亚群及经PHA作用3天后的CD4+T 淋巴细胞中的CD4+CD25+亚群;PCR检测结果显示,与未经人脐带源Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞处理的CD8+或 CD4+T淋巴细胞相比,Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞可显著上调这两类T淋巴细胞亚群FOXP3基因的表达。结论: 人脐带源Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞可能通过上调 FOXP3+CD4+CD25+及FOXP3+CD8+CD28-T淋巴细胞发挥免疫抑制作用,诱导免疫耐受,参与机体的免疫调节。