青蒿素干预大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

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目的:探讨青蒿素(artemisinin)对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响。方法:在无菌条件下取成年雄性Wistar大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养,传至3-4代,分别以10m M、5 m M、1 m M、0.1 m M、0.01 m M青蒿素作用于大鼠血管平滑肌细胞,培养24小时,以MTT和CCK8法检测分析细胞增殖情况以及确定最适干预浓度。并通过逆转录聚合酶链式反应检测平滑肌细胞增殖状态的指标增殖细胞核抗原(PCNA)的m RNA表达来进一步确认大鼠血管平滑肌细胞的增殖情况。用蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白BCL2-Associated X(Bax),B-cell lymphoma-2(Bcl2)的表达,计算Bax蛋白与Bcl2蛋白表达的比率,从而检测青蒿素对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响。同时用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期调控蛋白Cyclin-dependent kinase4(Cdk4)的蛋白表达,以检测青蒿素对大鼠血管平滑肌细胞有丝分裂周期的影响。使用膜联蛋白V和碘化丙锭(PI)双染色来检测大鼠血管平滑肌细胞的凋亡情况,通过流式细胞术评估。对实验结果进行统计学分析,统计软件为SPSS17.0,检验方法为Student’s t test(t检验),数据计量方法为平均值加减标准差,显著性差异设定为p<0.05。结果:分别用10m M、5 m M、1 m M、0.1 m M、0.01 m M青蒿素干预大鼠血管平滑肌细胞24小时后,MTT试验及CCK8试验结果发现1m M青蒿素已经可以明显抑制大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖,随着青蒿素浓度增加,对大鼠血管平滑肌细胞的抑制也随之加强,呈剂量依赖性。逆转录聚合酶链式反应定量分析发现1m M青蒿素组与媒介物对照组相比显著降低了大鼠血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的m RNA表达。蛋白印迹法(Western blot)结果发现青蒿素增加了BCL2-Associated X蛋白表达,降低了B-cell lymphoma-2蛋白的表达,使Bax/Bcl-2比率增加,Cyclin-dependent kinase4蛋白表达下降。流式细胞术发现与媒介物对照组相比较青蒿素显著增加了大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的数量。结论:青蒿素能够有效的抑制大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖,并诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡,说明青蒿素具有预防支架植入术后支架内再狭窄的潜在应用价值。
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