【摘 要】
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目的：制备含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和胸苷激酶(TK)基因两者融合基因的腺病毒,观察其对瘢痕疙瘩成纤维细胞的杀伤效应和旁观者效应。 方法：采用改良的AdEasy系统构建携带CDgly
【机 构】
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山东大学第二医院美容整形烧伤中心,山东,济南,250033
【出 处】
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第四届华东六省一市整形外科学术会议暨2007年浙江省整形、美容学术会议
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目的：制备含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和胸苷激酶(TK)基因两者融合基因的腺病毒,观察其对瘢痕疙瘩成纤维细胞的杀伤效应和旁观者效应。
方法：采用改良的AdEasy系统构建携带CDglyTK双自杀基因的重组腺病毒,293T细胞中大量扩增重组腺病毒,经腺病毒纯化试剂盒纯化后以感染复数(MOI)等于20感染原代瘢痕疙瘩成纤维细胞,荧光显微镜下观察感染效率,给予无毒的前体药物5-氟胞嘧啶(5-Fc)和无环鸟苷(GCV)48小时后,MTT法测定体外杀伤效应和旁观者效应；HE染色观察细胞形态变化情况；TUNEL法凋亡检测。
结果：重组双自杀基因腺病毒以感染复数等于20感染瘢痕疙瘩成纤维细胞时,荧光显微镜下观察感染效率大于95％,加入前药48小时后,转染双自杀基因的成纤维细胞数量明显减少,出现细胞形态改变；有明显胀亡和凋亡现象；前药作用48小时后,MTT测定转染自杀基因组的成纤维细胞存活率率与未转染成纤维细胞组有统计学差异,转染阳性细胞占50％和75％的成纤维细胞组的存活率与转染100％阳性成纤维细胞组无明显差异。
结论：重组CDglyTK双自杀基因腺病毒能有效地感染瘢痕疙瘩成纤维细胞,CDglyTK双自杀基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞有明显的杀伤效应和旁观者效应,细胞的死亡方式主要为凋亡和胀亡.
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