<正>本研究利用差异显示技术构建了2个cDNA差减文库,二化螟诱导上升与下降表达的基因分别出现在这2个cDNA差减文库中。将文库中得到的序列测序并拚接得到unisequence,然后将unisequence点在尼龙膜上。将明恢63二化螟取食6h叶鞘及对照RNA,反转录并用32P标记, 与尼龙膜杂交,寻找差异表达克隆。Northern blot验证后得到4个二化螟诱导上升表达克隆, 其中一个克隆B1-A04只被二化螟取食诱导,而不被机械损伤所诱导。设计引物扩增得到B1-A04 启动子序列-1569(从预测的转录起始位点上游1569 bp到转录起始位点下游446 bp),将该片断与GUS基因融合,通过农杆菌介导的遗传转化导入到水稻中,通过GUS染色、GUS活性测定、Northern blot等考察转基因植株中GUS的表达,结果发现:带有-1569片断的转基因植株在未被二化螟取食时,GUS在叶片、叶鞘中不表达,在茎杆、幼穗中表达;被二化螟取食6h 后,叶鞘与茎杆中GUS表达量显著上升,而叶片中仍然不表达。转基因植株中GUS的表达不被茉莉酸、水杨酸、脱落酸、乙烯诱导。从5’末端对该启动子进行缺失,又得到-1166、-582、 -371、-112四个片断,将这些片断导入水稻,考察GUS的表达。当启动子缺失到-582时, GUS组成型表达量显著上升,但其表达不再被二化螟诱导,这说明从-1569到-582之间存在着负调控区域,负责调控该启动子被二化螟诱导表达。