【摘 要】
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目的 通过联合超声靶向破碎微泡技术(UTMD)与脂质体/目的基因质粒DNA/核定位信号(PEI/DNA/NLS)复合物构建新型基因转导体系,并评价该体系转染293T细胞的转染效率.方法 用琼脂糖凝胶试验检测PEI/DNA/NLS复合物是否构建成功以及PEI/NLS对质粒DNA是否存在保护作用.用超声辐照仪对含有质粒pEGFP-DNA、PEI/DNA复合物,PEI/DNA/NLS复合物,SonoVu
【机 构】
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430030武汉市,武汉大学人民医院超声科
【出 处】
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第三届全国暨国际超声分子影像及生物效应和治疗学术会议
论文部分内容阅读
目的 通过联合超声靶向破碎微泡技术(UTMD)与脂质体/目的基因质粒DNA/核定位信号(PEI/DNA/NLS)复合物构建新型基因转导体系,并评价该体系转染293T细胞的转染效率.方法 用琼脂糖凝胶试验检测PEI/DNA/NLS复合物是否构建成功以及PEI/NLS对质粒DNA是否存在保护作用.用超声辐照仪对含有质粒pEGFP-DNA、PEI/DNA复合物,PEI/DNA/NLS复合物,SonoVue/DNA,SonoVue/PEI/DNA复合物以及SonoVue/PEI/DNA/NLS复合物等六组细胞融合度在90％以上的293T细胞辐照30 s,于细胞培养箱内培养24 h后,分别通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪来观察绿色荧光蛋白的表达情况及转染效率.同时使用CCK-8试剂对经UTMD联合PEI/DNA/NLS复合物的基因转导体系处理后的细胞进行细胞活性检测.结果 (1)琼脂糖凝胶实验证实PEI/DNA/NLS复合物的形成且在一定时间内对DNA存在保护作用.(2)倒置荧光显微镜及流式细胞仪证实UTMD+PEI/DNA/NLS复合物组基因转染效率优于UTMD+PEI/DNA复合物组和PEI/DNA/NLS复合物(均P＜0.05).(3)超声波的机械损伤以及PEI的化学毒性会造成细胞一定程度的损伤,但是各组细胞的细胞活性均高于80％,且各组细胞的活性差异无统计学意义.结论 UTMD联合PEI/DNA/NLS复合物构建新型的基因转导体系可以提高基因的转染效率,该基因转导体系可成为临床基因治疗的潜在转染方式.
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