【摘 要】
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目的通过用层粘连蛋白包被及未包被方式培养的肠神经干细胞生物学特性进行系统的比较,寻找合适的培养方式。方法从E15SD胎鼠的分离出肠管,经胶原酶消化及机械吹打后形成单细
【机 构】
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温州医学院附属第二医院育英儿童医院 小儿外科;
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目的通过用层粘连蛋白包被及未包被方式培养的肠神经干细胞生物学特性进行系统的比较,寻找合适的培养方式。方法从E15SD胎鼠的分离出肠管,经胶原酶消化及机械吹打后形成单细胞悬液,分别经两种方式进行培养;分别提取两种原代第5天培养的神经球,通过形态学、免疫荧光细胞化学以及流式细胞仪检测方法对其生长状态、增殖及分化能力的比较。结果 1.未包被组相对包被组来说,原代第五天的神经球,呈半贴壁生长,球体形态较规则,球体中央开始变黑、脱离表面;神经球周边未形成大量放射状的神经丝。2.荧光镜下发现两组传代神经球的Brdu都显阳性,包被组的球体周围放射状神经丝为神经元的轴突。3.培养原代第五天后,流式细胞仪检测未包被的神经干细胞(Nestin)阳性细胞比相对包被组显著增加(p<0.05),Brdu标记的增殖细胞百分比显著增加(p<0.05),神经元阳性百分比显著减少(p<0.05)。结论两类方案培养出肠神经干细胞特性有较大差异:未包被组加快了体外培养形成的神经球时间,且形态较规则,维持干细胞自我增殖,减少肠神经干细胞的分化,适宜作为体外增殖培养方式。
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