【摘 要】
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目的 观察P311在体外创伤模型中对表皮干细胞迁移的作用并探讨其机制.方法 (1)应用Ⅳ型胶原快速黏附法分离培养人ESC,同时构建腺病毒空载体pAdEasy一增强型绿色荧光蛋白fEGFP)及P311腺病毒表达载体pAdEasy-EGFP-P311,转染ESC.经丝裂霉素C处理2h后行划痕实验.划痕后of即J亥Ej)、24、48、72h测量固定位置细胞迁移距离.(2)分离培养P311Ko及wT新生小
【机 构】
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400038 重庆第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
【出 处】
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第十届全国烧伤救治专题研讨会暨福建省第八次烧伤外科学术研讨会
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目的 观察P311在体外创伤模型中对表皮干细胞迁移的作用并探讨其机制.方法 (1)应用Ⅳ型胶原快速黏附法分离培养人ESC,同时构建腺病毒空载体pAdEasy一增强型绿色荧光蛋白fEGFP)及P311腺病毒表达载体pAdEasy-EGFP-P311,转染ESC.经丝裂霉素C处理2h后行划痕实验.划痕后of即J亥Ej)、24、48、72h测量固定位置细胞迁移距离.(2)分离培养P311Ko及wT新生小鼠表皮干细胞,经丝裂霉素C处理2h后行划痕实验.划痕后0、24、48、72h测量固定位置细胞迁移距离.(3)Pulldown实验检测P311对腺病毒转染人ESC及P311.Ko及wT新生小鼠表皮干细胞中RhoA、Cdc42、Racl活性的影响.结果 划痕后24h,P311高表达组人ESC迁移距离为522.9±50.1urn,明显高于EGFP组344.9±72.8um,P＜0.01.划痕24h,小鼠P311wT组ESC迁移距离为335.8um±63.9um,明显高于小鼠P311Ko组151.1±79.5um.Pulldown实验显示,P311高表达组RhoA、Cdc42、Racl活性较EGFP组增高了1.4、1.8、2.0倍.小鼠P311Ko组较wT组RhoA、Cdc42、Racl活性分别下降了49.6％、69.8％、78.6％.结论 P311可能通过活化RhoA、Cdc42、Racl促进ESC的迁移功能.
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