【摘 要】
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目的筛选和定量检测在T细胞活化过程中表现出显著改变的成熟型miR。方法采用改良通用茎环引物,在其茎环尾端引入8个随机碱基片段,用于成熟型miR逆转录,建立SYBR Green PCR筛
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目的筛选和定量检测在T细胞活化过程中表现出显著改变的成熟型miR。方法采用改良通用茎环引物,在其茎环尾端引入8个随机碱基片段,用于成熟型miR逆转录,建立SYBR Green PCR筛选和定量检测miR的方法。对植物血凝素(PHA)刺激培养0、16、24、48、72h的人外周血T淋巴细胞内miR进行筛选(87个靶miR,经PubMed检索可能与免疫功能相关),并用以进行定量检测分析。结果通用茎环引物法的最低检测能力为103拷贝/μl的miR-155 cDNA标准品。通用茎环引物方法筛选T细胞87个miR时,发现其中85个miR在PHA刺激前、后检测Ct值无变化,而miR-150和miR-155表达量分别可下降超过10倍和升高8倍(Z=-2.023,P=0.043;Z=-2.032,P=0.042),筛选出2个miR在T细胞激活过程中会出现明显变化。结论 miR-155和miR-150在T细胞活化过程中变化显著,有可能成为检测个体免疫功能的候选靶分子。
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