【摘 要】
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近年来国际上已认可蜂王浆主蛋白1(MRJP1)是代表蜂王浆新鲜度生物标志物.为此,我们通过蜂王浆主蛋白家族氨基酸序列的同源性分析,筛选出了1段MRJP1的特异性多肽(IKEALPHVPI
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近年来国际上已认可蜂王浆主蛋白1(MRJP1)是代表蜂王浆新鲜度生物标志物.为此,我们通过蜂王浆主蛋白家族氨基酸序列的同源性分析,筛选出了1段MRJP1的特异性多肽(IKEALPHVPIFD),并以此多肽为抗原免疫大白兔,制备了一种MRJP1的特异性多克隆抗体(antiSP-MRJP1 antibody).Western blot分析结果显示,该抗体只能与蜂王浆中的主蛋白1产生免疫印迹,而另一种采用MRJP1蛋白编码基因表达的重组MRJP1蛋白作为抗原制备的多抗则会与王浆主蛋白家族的所有蛋白发生交叉反应.以MRJP1特异性多抗作为一抗的ELISA方法分别检测在40℃下保温不同时间的鲜王浆,结果显示,与冷冻保存的鲜王浆相比,保温7天、14天、21天、28天、35天、42天和49天的鲜王浆中的MRJP1蛋白含量分别下降了37.26%、55.91%、57.96%、60.60%、65.71%、72.73%和73.12%.于此同时,我们将经上述保温处理的鲜王浆进行了SDSPAGE蛋白电泳分析,然后用成像仪对所得蛋白电泳图像进行不同蜂王浆主蛋白条带灰度分析.结果显示,与,与冷冻保存的鲜王浆相比,经保温处理的鲜王浆中的蜂王浆主蛋白家族成员MRJP1、MRJP2、MRJP3、MRJP5蛋白含量的下降程度与保温时间成正相关(p <0.0001).该结果证实,我们所制备的MRJP1特异性多抗对MRJP1蛋白具有高度的专一性,采用此多抗为一抗的ELISA方法是一种非常实用和应用与质量标准的蜂王浆新鲜度检测新技术.
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