【摘 要】
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目的:制备大鼠大脑中动脉缺血(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型后,分别采用单独骨髓间充质干细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)移植及单独氯吡格雷灌胃治疗与氯吡格雷灌胃联合BMSCs移植治疗,观察比较神经功能评分、脑组织梗死面积及Bcl-2、Bax因子表达水平变化,探讨氯吡格雷对BMSCs移植治疗大鼠缺血再灌注脑损伤的
【出 处】
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中国康复医学会脑血管病专业委员会换届暨第十五次全国脑血管病康复学术年会、湖南省康复医学会神经康复专业委员会2012学术年
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目的:制备大鼠大脑中动脉缺血(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型后,分别采用单独骨髓间充质干细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)移植及单独氯吡格雷灌胃治疗与氯吡格雷灌胃联合BMSCs移植治疗,观察比较神经功能评分、脑组织梗死面积及Bcl-2、Bax因子表达水平变化,探讨氯吡格雷对BMSCs移植治疗大鼠缺血再灌注脑损伤的促进作用及可能机制.
方法:选取200g左右SD大鼠处死后取其长骨,采用全骨髓培养法体外培养大鼠BMCSs,选择3-5代细胞用PBS缓冲液稀释并定容制成2×106/ml细胞混悬液备用.线栓法制作大鼠MCAO模型若干,将到达评分标准的大鼠模型随机分为模型对照组(B组,n=12)、氯吡格雷灌胃组(C组,n=12)、单独BMCSs移植组(D组,n=12)及氯吡格雷灌胃联合BMCSs移植组(E组,n=12),另将部分大鼠只切开皮肤分离至翼腭动脉后即缝合,为假手术组(A组,n=12).在大鼠MCAO模型制作成功后24小时,D及E组选择尾静脉途径给予己定容的细胞混悬液1 ml/每只异体移植.C及E组大鼠给予氯毗格雷25mg/kg灌胃并持续灌胃至处死共14天,A组不做任何处理.造模成功后24小时及治疗14天时给大鼠进行神经功能评分,并在14天处死大鼠,取其脑组织行HE染色、TTC法测脑梗死面积及Bcl-2.Bax蛋白免疫组化检测等进一步处理.
结果:1、大鼠神经功能评分结果表明,B组、C组、D组及E组经干预后评分分别为3.50±0.67、2.25±0.62、2.00±0.66、1.75±0.62((-x)±s,分),除B组外,其他组别前后比较均有显著性差异(P<0.05),提示三种干预方式均能促进大鼠神经功能恢复,其中各组间两两比较均有显著性差异,提示D组优于C组,E组效果最好(P<0.05).
2.TTC法测量脑梗死体积,B组、C组、D组及E组依次为209.64±6.52、138.58±4.51、111.35±4.53、77.13±3.70((-x)±s,mm3).各组间两两比较,差异均有显著性意义(P<0.05),E组梗死面积最小.
3.Bcl-2免疫组化结果显示A组、B组、C组、D组及E组分别为8.42±1.03、14.07±1.25、26.03±2.36、32.74±2.35、43.72±3.14((-x)±s,个),A组为正常组,余四组E组阳性细胞数量最多,D组较C组细胞数量增加,B组细胞数最少.
4.Bax免疫组化结果显示A组、B组、C组、D组及E组分别为7.01±0.35、39.84±2.09、29.92±1.89、21.17±1.71、11.36±1.56((-x)±s,个),各组两两比较均有显著性差异(P<0.05),其中A组为正常组,余四组E组阳性细胞数量最少,D组较C组细胞数量减少,B组细胞数最多.
结论:1.氯毗格雷灌胃和BMSCs移植联合治疗脑缺血再灌注损伤的疗效优于单氯毗格雷灌胃或单BMSCs移植治疗.
2.氯毗格雷对BMSCs移植治疗脑缺血再灌注损伤有促进作用.作用机制可能为上调Bcl-2蛋白的表达并降低Bax蛋白的表达.抑制细胞凋亡.
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