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目的探讨"风寒湿"外邪影响类风湿关节炎(痹证)病证发生的分子机制,促进中医论治类风湿关节炎的理论提升和临床指导应用。方法 (1)雄性SD系大鼠90只,随机分为正常对照组、单纯AIA组和AIA风寒湿痹组,每组30只。正常对照组和单纯AIA组大鼠正常饲养;AIA风寒湿痹组大鼠每天置于智能人工气候箱内接受风寒湿刺激1次,每次4 h,14天后于尾根部皮下注射0.1ml含200mg Mtb的CFA,CFA免疫后再接受风寒湿刺激6天。CFA免疫前1天、免疫后第6天以及第10天取血,分离外周血单核细胞(PBMCs),流式细胞术检测CD4~+Th17和CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞,分析确定Th17/Treg细胞比例失衡。(2)雄性SD系大鼠,随机分为正常组和AIA风寒湿痹组。大鼠接受风寒湿刺激或正常饲养14天,麻醉后无菌取出脾脏,分离富集CD4~+T细胞,采用流式荧光激活细胞分选法(FACS)分选异常分化的CD4~+Th17细胞亚群。筛选有85%MHC II相同点的雄性SD系大鼠,将CD4~+Th17细胞亚群过继性转移到正常饲养大鼠后再注射CFA诱导AIA,观察AIA的发病时间和发病率,称量动物体质量、评定关节炎指数、测量后足肿胀体积,从而确认CD4~+Th17细胞对AIA风湿寒痹大鼠病证发生的作用。(3)筛选有85%MHC II相同点的雄性SD系大鼠,随机分为空白组和CD4~+Th17细胞亚群过继性转移组。实验第1天于大鼠尾静脉注射2×106个FACS分选的CD4~+Th17细胞;实验第2天于大鼠尾根部皮下注射0.1ml含200mgMtb的CFA诱导AIA。发病后,分离PBMCs,流式细胞术检测外周血CD4~+T细胞pSTAT3蛋白、CD4~+IL-17~+淋巴细胞p STAT4及CD4~+IL-17~+淋巴细胞p STAT6的蛋白平均荧光强度,荧光定量PCR检测外周血CD4~+T细胞中转录因子RORγt mRNA,Foxp3 mRNA,STAT3、STAT4、STAT6 mRNA的表达。结果随着AIA风寒湿大鼠病情的进展,CD4~+Th17细胞比例逐渐增加,CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例逐渐降低,与同时间点单纯AIA组大鼠比较,差异具有显著性(P<0.01)。与模型组比较,注射CFA组大鼠体质量显著减轻,足肿胀体积、关节评分均显著增加(P<0.01)。与空白组比较,过继性转移组大鼠外周血CD4~+T细胞中转录因子Foxp3 mRNA表达量显著降低,STAT3、STAT4、STAT6 mRNA、RORγt mRNA表达量显著增加,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 "风寒湿"外邪通过JAK/STAT信号通路激活Th17细胞分化,并抑制Treg细胞分化导致Th17/Treg细胞失衡,从而促进RA病证发生。