酪蛋白酶解可生成大量生物活性肽,其中的酪蛋白磷酸肽具有螯合铁、促进铁吸收作用,为提高酪蛋白磷酸肽铁的螯合率、初步探讨其螯合机制,开展了酪蛋白源铁螯合肽的酶解优化和柱层析方法比较研究。试验以酪蛋白为原料,采用胰蛋白酶在底物浓度47.2mg/mL、E/S 1.92%,pH 8.31和温度54.8℃条件下以时间作为参变量进行水解,对比酶解液磷含量和螯合活性,发现2h时水解基本完全且铁螯合活性最佳,此时水解度为12.38%、磷含量1.9mg/g,经钙乙醇沉淀法及冷冻干燥得到磷酸肽粗品螯合率为2.32mg/g。采用阴离子交换、亲和层析、Sephadex G-25凝胶过滤三种柱层析方法比较研究分离纯化铁螯合肽的效应。结果表明,三种柱层析方法均可显著提高酪蛋白磷酸肽铁的螯合率,其螯合率从2.32mg/g分别提高到28.1mg/g、32.4mg/g、22.6mg/g,阴离子交换、亲和层析方法获得的螯合肽其螯合铁的活性优于Sephadex G-25凝胶法。研究结果可为高螯合率酪蛋白磷酸肽铁的制备提供技术参数,为酪蛋白磷酸肽螯合铁的机制研究提供借鉴。