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目的 了解LPS对于抗肿瘤细胞药物MTX诱导的RAW264.7巨噬细胞凋亡作用具有拮抗作用.方法 培育RAW264.7巨噬细胞,在96孔板加入不同的细胞刺激物(LPS、MTX及LPS抑制物CLIP 095),LPS浓度分别设为0、1、10、100ng/ml,MTX浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μM,在特定的时间点用Alamar Blue,CCK8和MTT的方法分析RAW264.7的细胞增殖及其活性.同时在6孔板培育RAW264.7,不同浓度的LPS、MTX及LPS抑制物刺激4-6h,提取细胞蛋白,用Western Blotting技术测定各孔的Bcl-2、P38和caspase家族蛋白的差异性.接着,采用流式细胞仪检测不同药物刺激的6孔板细胞凋亡及细胞周期差异.结果 MTX抑制二氢叶酸还原酶,使细胞停留在G1/S转换期,是一种可靠的促细胞凋亡药物,并且相对比较廉价.通过实验我们可以看到,LPS可以拮抗MTX导致的RAW264.7细胞的凋亡作用,促进巨噬细胞的增殖并提高其活性,并且流式细胞仪结果显示LPS可以促进巨噬细胞G2M期比重的明显增加,促进细胞增殖分裂.通过Western Blotting,我们发现LPS的这一作用机制与caspase7、8、14等无关,而与caspase3、Bcl-2、P38的表达量改变有关.结论 一定浓度的LPS能上调Bcl-2及P38表达,从而拮抗MTX的促凋亡作用.