C2C12细胞培养分化及肌纤维类型鉴定

来源 :2013第四届中国睡眠大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chifelonh
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目的:阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征对日常生活的影响以及对全身多系统功能损害而成为近年研究的热点,以上气道肌肉易塌陷性为主要特征,但其结构基础尚未完全阐明.因此需深入探索上气道肌肉肌蛋白的合成、纤维类型及其相对比例的改变.本实验则旨在建立体外骨骼肌细胞培养分化与肌纤维鉴定技术模型.方法:取C2C12细胞含10%FBS的高糖DMEM培养基中增殖培养,生长到75%-100%融合时,用胰酶洗脱离心后以合适的浓度用含20 mL/L马血清的高糖DMEM培养基重悬,置37℃,体积分数5%C02的孵箱内分化培养成肌管细胞,免疫荧光技术检测生肌素myogenin的表达,验证C2C12细胞的分化潜能,R-TPCR,western-blot技术检测肌球重链蛋白亚型的表达,鉴定肌纤维类别。结果:C2C12细胞分化前呈梭形,贴壁、融合生长,分化时逐渐变长,并形成肌管,细胞核为多核,呈串珠样排列。免疫荧光检测出myogenin表达,验证了C2C12细胞具有分化潜能,RT PCR, western-blot显示所培养的C2C12细胞在马血清诱导下分化为肌管细胞后,可表达MHC I, MHCIIA, MHCIIB3种不同类型肌球重链蛋白,并计算MHC I型纤维蛋白表达所占比例,约60%。结论:本实验成功建立了培养分化C2C12肌卫星细胞,测定肌球重链蛋白的表达及肌肉纤维的分化的模型,为今后睡眠呼吸暂停相关上气道塌陷性机制研究奠定了基础。
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