超细炭黑对星形胶质细胞谷氨酸和ATP释放的影响及其机制研究

来源 :中国环境科学学会环境医学与健康分会2014年会暨环境与健康国际研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ryu_sh
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  目的 探讨超细炭黑(ultrafine carbon black,ufCB)对体外培养的星形胶质细胞谷氨酸和ATP 释放的影响及其机制.方法 采用连续传代法建立体外星形胶质细胞的纯化培养体系,ufCB(0、1、5、10、20、40μg/cm2)单独及其(40μg/cm2)与不同半通道抑制剂(CBX;43Gap27 和10Panx1)联合作用细胞72h 后,采用碘化丙啶染色-流式细胞术测定细胞存活率;分别采用Amplex(R) Red氧化法和ATP 生物发光检测技术测定谷氨酸和ATP 的释放量;采用染料摄取实验测定细胞的半通道活性;并分别采用Western blot 和免疫荧光技术测定连接蛋白Connexin 43(Cx43)和Pannexin 1(Panx1)的蛋白表达和分布.结果 不同浓度ufCB 处理72h 对细胞存活率没有明显影响,可引起细胞谷氨酸和ATP 的释放呈剂量依赖性增加.ufCB 处理72h 后可显著增加细胞的半通道活性,10、20和40μg/cm2 组细胞的半通道活性分别为对照组的160%,231%和319%.ufCB可引起细胞Cx43 和Panx1 蛋白表达及其在细胞膜上的分布增加,并呈现出随剂量增加而增加的趋势.加入不同的半通道抑制剂作用后,CBX 可抑制ufCB 对半通道活性的升高作用;Cx43 半通道抑制剂43Gap27 和Panx1 半通道抑制剂10Panx1均可部分抑制ufCB 对半通道活性的升高作用.进一步,CBX 可抑制ufCB 引起的谷氨酸和ATP 释放;43Gap27 可同时抑制部分谷氨酸和ATP 的释放;10Panx1仅可抑制部分ATP 的释放.结论 超细炭黑可通过激活Cx43 和Panx1 半通道促进星形胶质细胞谷氨酸和ATP 的释放;Cx43 半通道可同时介导谷氨酸和ATP的释放,Panx1 半通道可介导ATP 的释放.
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