小鼠Ii基因克隆、表达及其抗体制备

来源 :中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ilbgsm
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为获取小鼠Ii编码基因,利用原核表系统进行诱导表达,提取与纯化目的蛋白,并制备其相应抗体。应用RT-PCR获取小鼠Ii编码基因;插入pGEX-4T-1表达载体,SDS-PAGE分析蛋白表达;纯化融合蛋白,免疫家兔,制备抗血清。扩增出了与预期大小相同的700bp的特异性基因条带,其与GenBank登录的鼠Ii同源性高达99.2%~99.8%;SDS-PAGE检测到大小约49.5kd的特异性蛋白条带;应用琼脂双向免疫扩散、间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光法等进行抗体活性鉴定,证明获得了特异性强、具有良好生物活性的抗体。本试验为内源性靶向Th细胞表位疫苗、肿瘤的免疫与治疗及Ii在免疫应答中的促进作用奠定了一定基础。
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