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目的:食道疾病日益增多成为危害人们生活的又一大杀手.课题组围绕食道组织工程这一最终目标进行了一系列的研究.实验室首先对支持食道上皮生长的基膜的拓扑结构和蛋白质组成进行了定性定量分析,并以此为前提,借用电纺丝技术体外构建食道上皮组织,并对其的组织和细胞相容性进行了检测和完善.
方法:运用实验室自制的可控电纺丝系统将聚己内酯、丝素蛋白(提取自浙江产蚕宝宝)以及两者混合制备出了具有食道基膜结构的电纺丝纤维膜.另一方面,从猪食道中提取基膜蛋白混合液,Coating于上述纤维膜,以期模拟出适合食管上皮细胞生长的微环境,采用纤维构象、降解性、机械强度和亲水性等对支架性能进行评价表征.从猪食道上获取原代上皮细胞,种植于上述聚己内酯、丝素蛋白和聚己内酯/丝素蛋白以及基膜蛋白涂覆的支架,以MTT、扫描电镜、激光共聚焦显微镜、免疫组化等技术评价了上述电纺丝支架的细胞相容性和生物功能。
结果:制备的三种电纺丝支架聚己内酯、丝素蛋白和聚己内酯/丝素蛋白,具有与天然基膜组织相近纤维构造,将基膜蛋白提取液,即:胶原蛋白Ⅵ、层黏连蛋白、巢蛋白和蛋白聚糖等Coating于聚己内酯支架后,支架具有优良的细胞相容性,在促进上皮细胞生长的同时表达上皮细胞的生物功能。
结论:此法制备的电纺丝支架在形态结构和蛋白组成方面与猪食道基膜非常相似,可以用于构建食道组织的进一步研究。