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植物寄生线虫病是世界范围内对经济作物危害最大的植物病害之一,每年全球农作物由于植物线虫侵染导致的损失达到80亿美元.对于这些植物寄生线虫的防治研究具有十分重要的意义.其中RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术被认为是一种具有极大潜力的植物寄生线虫防治策略.同时,RNAi技术也是目前一种常用的研究植物线虫基因功能的方法,通过检测RNAi处理前后的线虫侵染植物的能力来验证靶标基因的功能.但目前此种方法所需的时间都比较长,大多数方法都需要构建转基因植物,研究成果相对较高.甘薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)是一种迁移性内寄生植物线虫,其主要宿主为马铃薯和甘薯,从基因组数据中发现D.destructor在进化关系上处于自由生活线虫和定栖性内寄生线虫之间,其培养成本相对于定栖性内寄生线虫更少,具有作为研究植物寄生线虫的模式线虫的潜力.我们从D.destructor的基因组中预测了两个线虫特有的保守基因：肌钙蛋白C基因Dd-pat-10和钙调蛋白基因Dd-unc-87,并对其进行克隆,以这两个基因为靶标,建立了D.destructor的体外RNAi系统,并对其侵染宿主的能力进行了检测.我们首先通过FITC标记检测D.destructor吞咽浸泡溶液的能力方法建立了可行的RNAi体系,并通过体外转录的方法构建了不同大小的Dd-pat-10 dsRNA,通过荧光定量PCR检测Dd-pat-10的表达量确定了可用于D.destructor体外RNAi的dsRNA的适宜大小,之后通过镜检观察发现Dd-pat-10和Dd-unc-87被干扰后D.destructor的活跃性下降,并通过沙管实验发现Dd-pat-10和Dd-unc-87被干扰后D.destructor的迁移能力下降,最后我们将干扰处理的线虫接种到甘薯中,培养7～10d后发现与对照相比,Dd-pat-10和Dd-unc-87被干扰后D.destructor的侵染宿主能力下降.本研究建立了D.destructor的体外RNAi系统,并在短时间内检测到靶标基因干扰后线虫侵染能力变化的表型,将有助于我们高通量研究植物寄生线虫的基因功能,为进一步对植物寄生线虫RNAi防治策略的应用提供理论依据和研究基础.