rAlb-34k2蛋白对DENV-2感染靶细胞的影响初探

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目的 :蚊唾液在虫媒病毒致病中发挥重要的作用,本文通过原核重组表达白蚊伊蚊唾液特异性34k2蛋白(rAlb-34k2),探讨重组白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白对DENV-2的易感性影响及其对Raw264.7细胞产生IL-1β、CCL2的影响。方法:利用qRT-PCR法检测不同浓度rAlb-34k2蛋白(1ng/μL、10ng/μL)干预下,BHK细胞和Raw264.7细胞胞内病毒NS5基因mRNA的表达差异;利用RT-PCR相对定量法检测rAlb-34k2蛋白(10ng/μL)干预下Raw264.7细胞IL-1β、CCL2 mRNA的表达变化。结果 :10ng/μL的rAlb-34k2蛋白干预时,MOI为1和0.5时均能引起BHK细胞胞内DENV2 NS5 RNA增加,病毒对照组病毒核酸水平的2.68倍(MOI=1,12h,P <0.01)、3.63倍(MOI=1,24h,P <0.01)、1.62倍(MOI=1,48h,P <0.05)、3.78倍(MOI=0.5,12h,P<0.01),且该现象可被兔抗34k2抗体所阻断,而热灭活蛋白组胞内病毒核酸变化与病毒对照组无统计学差异。以Raw264.7细胞为感染靶细胞,在MOI=5时10ng/μL的rAlb-34k2蛋白干预组胞内病毒NS5核酸水平为病毒对照组的5.2倍(6h,P <0.01)、3.5倍(12h,P<0.05);而热灭活蛋白组与病毒对照组无差异;细胞因子的检测结果显示:10ng/μLrAlb-34k2蛋白组中IL-1βmRNA随时间延长而表达上调(P <0.001),其中在18h是干预组与未干预组间具有统计学差异(P <0.05);CCL2 mRNA的表达在18h内,干预组内表达更为快速被下调(P <0.01)。结论 :白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白在早期可促进DENV-2在BHK细胞及Raw264.7细胞中增殖,并能调控促炎细胞因子IL-1β和趋化因子CCL2 mRNA的表达。
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