【摘 要】
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目的：初步探讨蔗糖环境下细胞外DNA (extracellular DNA,eDNA)对变形链球菌生物膜形成的作用.方法：在1％蔗糖环境下,于光滑玻片上建立变形链球菌生物膜模型,37℃、微需氧环境
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目的：初步探讨蔗糖环境下细胞外DNA (extracellular DNA,eDNA)对变形链球菌生物膜形成的作用.方法：在1％蔗糖环境下,于光滑玻片上建立变形链球菌生物膜模型,37℃、微需氧环境下(5％O2、85％N2、10％ CO2)分别培养至6h、12h、24h、48h,每个生长时间均设DNase Ⅰ处理组和未处理组,其中处理组于结束培养前1h加入终浓度为100U/ml的DNase Ⅰ.培养结束后,以1ml无菌生理盐水冲洗两次去除浮菌,生物膜以SYTO-9/PI双荧光染色.以激光共聚焦显微镜分层扫描生物膜样本,Imaris软件对图像进行三维重建并测量其总生物量、生物膜厚度及红色荧光代表的eDNA和膜受损细菌量.以单因素方差分析进行数据分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果：1％蔗糖环境下,变形链球菌细菌黏附及分布密度逐渐增加,生物膜总生物量和厚度随时间增加,eDNA及膜受损细菌量随时间增加至24h达高峰,48h又显著下降.各时间DNase Ⅰ处理组与未处理组对比：6h、12h、24h、48h变形链球菌生物膜总生物量均减少(P＜0.05)；除6h外,各时间生物膜厚度亦均减小(P＜0.05)；除48h外,各时间段生物膜中eDNA及膜受损细菌量均减少(P＜0.05),其中24h减少最为显著.结论：1％蔗糖环境下,变形链球菌eDNA是促进其细菌黏附及生物膜形成的重要细胞外基质成分.变形链球菌生物膜形成至24h时,eDNA释放最多.
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