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研究目的:在许多细胞类型和组织中,"衰老基因"(p66shc)的磷酸化介导氧化应激。在脉管系统中,p66shc在与高血压等病理生理状况相关的内皮功能障碍中起重要作用。SHC具有三种亚型,相对分子质量分别为46,52和66k Da。p66shc在丝氨酸36上磷酸化,在氧化应激反应和长寿中起着重要作用。p66shc基因缺失可预防高血压诱导的内皮功能障碍和氧化应激。RNAi介导内源性p66shc下调,通过激活S1177处的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)磷酸化而导致血压升高。因此,预防这种磷酸化可能对与氧化损伤有关的疾病具有治疗作用。研究表明,运动能使血管健康和疾病状态发生一些有益的适应性变化。定期的体育锻炼已被证明可以降低血压,因此是治疗高血压的众多建议之一。然而,耐力运动训练对高血压患者p66shc磷酸化的影响尚不清楚。我们研究了耐力运动训练对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉p66shc磷酸化的作用。研究方法:将8周龄的自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠随机分成3组:WKY鼠(WKY,n=10),SHR控制组(SHR-C,n=10),和SHR耐力训练组(SHR-E,n=10)。耐力训练在跑台上进行,以倾斜度为0,20m/min的速度运动16周,每周5天,每天60分钟。16周运动结束后,对大鼠腹腔注射氯胺酮(80 mg/kg)和甲苯嗪(12 mg/kg)的混合物进行麻醉。将聚乙烯管(PE-50)插入左颈总动脉(CCA)和股动脉,并与压力传感器(Gould P23XL)连接,压力传感器与前置放大器(AD instrument,USA)相连。使用Chartpro软件(Adinstruments,USA)分析收缩压、舒张压和平均血压。同时,利用尾部血压监测系统测量尾部收缩压,并用Chartpro软件进行分析。记录颈总动脉(CCA)和股动脉(FA)的血压波。同时获得心电图,测量心电图R波至CCA和FA的时间间隔。测定了CCA到FA的血压传递时间(t),主动脉通路夹层后直接测量两个插管点之间的距离,并在主动脉表面加棉线。bpPWV计算为距离(d)/时间(t),其中d=颈动脉到股动脉的距离,t=(r tocca)+(r tofa)。通过荧光素化学发光法测定超氧阴离子,提取血管组织,在充气Krebs-Hepes缓冲液中制备暗适应的荧光素溶液(5μm),将主动脉环浸入荧光素溶液中,用单光光度计进行化学发光检测,化学发光信号在2分钟内被整合。主动脉被切成2-3毫米长的环,每个环连接到一个等距力传感器,悬浮在一个器官室中,充满7.5毫升Krebs缓冲液,并与95%O2/5%CO2通气,连续记录等长张力,平衡1小时后,用苯肾上腺素(0.3μM)预收缩环,然后通过累积添加乙酰胆碱(1nm到10μM)观察内皮依赖性舒张。Westernblot用于检测血管组织中p-p66shc,SHC,p-PKCb2,PKCb2,p-e NOS,e NOS,Ref-1和Mn SOD蛋白质的表达。研究结果:与SHR-C组相比,耐力运动训练显著改善了SHR主动脉的动脉血压、内皮依赖性舒张、中心脉波速度(cPWV)和超氧化物生成。SHR-C组中PKCb2和p66shc(s36)的磷酸化显著高于WKY组,但通过耐力运动训练恢复了上述功能。与SHR-C相比(P<.05),SHR主动脉中PKCb2和p66shc蛋白质总量无变化。此外,通过耐力训练(SHR-E组与SHR-C组,P<.05),SHR主动脉内皮一氧化氮合酶(e NOS)磷酸化和锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)表达显著增加。研究结论:这些数据表明,耐力运动训练通过减少PKCb2和p66shc磷酸化以及增强SHR中的e NOS和Mn SOD蛋白质的表达来抑制血压的升高。