大豆营养丰富,但是同时也存在多种抗营养因子影响其在动物体内的有效利用,如导致仔猪腹泻,显著降低仔猪和生长猪的日增重、日采食量和饲料转化效率等,极大限制了大豆利用效率,给养猪生产带来了严重的影响.其中,β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白是最主要的热稳定性大豆抗原蛋白,胰蛋白酶抑制因子和凝集素是两种最主要的热不稳定性蛋白类抗营养因子.尽管这些大豆主要抗营养因子的基本理化特性已被逐渐被认识,其抗营养作用的部分机制也逐渐被揭示,但许多深层次的重要问题目前仍未能得到解决.主要瓶颈之一就是缺乏成熟可靠的检测技术来灵敏及准确地测定大豆、大豆制品和动物体内中的这些主要的抗营养因子.因此,要想实现在生产中通过遗传育种或加工工艺灭活抗原蛋白及深层次研究其在动物体内的过敏机理,必须开发出特异性强和灵敏度高的检测主要大豆抗营养因子的技术体系.本试验通过免疫动物制备多克隆抗体和单克隆抗体抗体,建立一种检测大豆β-conglycinin的双抗夹心ELISA方法,目前还没有相关文献报道用双抗夹心法检测大豆中的β-conglycinin.参考郭顺堂(2004)专利中的方法分离纯化大豆抗原蛋白,得到高纯度的β-conglycinin,运用SDS-PAGE方法及Quantity One软件鉴定其纯度.用纯化的β-伴大豆球蛋白免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠,分别制备兔抗β-伴大豆球蛋白多克隆抗体和鼠抗β-伴大豆球蛋白单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA方法.在优化的检测条件下,双抗夹心ELISA的线性范围为(3～100) ng/ml,检测限达1.63ng/ml.添加回收试验中,β-伴大豆球蛋白的平均回收率在88.1％ ～ 106.6％,批间和批内变异系数分别小于8.9％和13.1％.该双抗夹心ELISA方法表现出较好的精确性和可重复性.因此,本研究所建立的双抗夹心ELISA方法能够满足大豆样品中β-conglycinin的灵敏性检测.