【摘 要】
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目的：构建及鉴定p16基因真核表达质粒pcDNA3-HA-p 16,探讨外源性p16基因对骨肉瘤细胞系U-2OS的抑制效应.方法：1.RT-PCR扩增p16基因.2.通过分子生物学技术构建p16真核表达质粒pcDNA3-HA-p 16.3.采用脂质体转染的方法将外源性p16基因导入U-2OS细胞.4.通过免疫荧光、Western blot验证pcDNA3-HA-p 16在U-2OS细胞中的表达.5
【机 构】
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川北医学院附属医院骨科,四川南充 637000
【出 处】
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海峡两岸骨科专委会学术交流会、抗震救灾五周年学术研讨会暨第十届华西国际骨科论坛
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目的：构建及鉴定p16基因真核表达质粒pcDNA3-HA-p 16,探讨外源性p16基因对骨肉瘤细胞系U-2OS的抑制效应.方法：1.RT-PCR扩增p16基因.2.通过分子生物学技术构建p16真核表达质粒pcDNA3-HA-p 16.3.采用脂质体转染的方法将外源性p16基因导入U-2OS细胞.4.通过免疫荧光、Western blot验证pcDNA3-HA-p 16在U-2OS细胞中的表达.5.采用CCK-8法检测细胞增殖.6.应用PI单染法分析细胞周期分布.7.DNA ladder法结合PI单染法观察细胞凋亡.结果：1.经重组质粒的酶切鉴定与DNA测序鉴定,成功构建了p16基因真核表达质粒pcDNA3-HA-p 16.2.重组质粒通过脂质体转染的方法在骨肉瘤细胞系U-2OS中稳定表达,p16主要分布于细胞核.3.p16显著抑制U-2OS细胞的增殖(P＜0.05),而且该作用在一定范围内呈现明显的剂量效应关系.4.p16致使U-2OS G1期细胞比例显著升高(P＜0.05),而S期细胞比例显著降低(P＜0.05).5.p16导致U-2OS细胞凋亡率上升明显(P＜0.05),DNA经琼脂糖凝胶电泳后呈现典型的DNA ladder.结论：1.成功构建了p16的高效真核表达质粒pcDNA3-HA-p 16,且通过脂质体转染的方式其能在骨肉瘤细胞系U-2OS中稳定表达.2.抑癌基因p16显著抑制U-2OS细胞增殖,且该作用在一定范围内呈现明显的剂量效应关系；p16导致U-2OS细胞阻滞于G1期；并显著促进细胞凋亡.因此p16具有显著抑制U-2OS细胞的效应.
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