cd36基因敲除斑马鱼的建立及其功能研究

来源 :第三届全国斑马鱼PI大会暨中国动物学会斑马鱼分会成立大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wanghan0106
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  CD36属于B类清道夫受体家族成员,其结构为跨膜细胞表面糖蛋白.哺乳动物的CD36在多种类型的细胞中都有分布,可以与多种配体结合,参与机体的多种生理及病理反应.目前对CD36 在鱼类中功能的研究还知之甚少.本研究首先克隆了斑马鱼cd36 基因(zcd36)ORF的全长,构建了zcd36-EGFP-pcDNA3.1 真核表达载体,对HEK293T 细胞进行了转染,发现zCd36 定位在细胞膜上,与哺乳动物CD36 的亚细胞定位相一致.为探究斑马鱼cd36 基因是否参与脂味觉信号通路,我们用构建的zcd36-pcDNA3.1 载体对HEK293T 细胞进行转染,然后用长链脂肪酸亚油酸(LA)对其进行诱导,检测5-羟色胺(5-HT)的前体激酶色氨酸羟化酶-1(tph-1)基因的表达,发现tph-1 在转染zcd36 的细胞中的表达显著上调;而当用LA 与CD36 特异性结合的抑制剂SSO 处理后,显著抑制tph-1 的表达.这些数据表明 zCd36是一种在细胞膜上表达的脂肪酸受体,可能介导脂味觉信号通路.为了进一步研究鱼类cd36的功能,我们利用TALEN 技术对斑马鱼cd36 进行了基因敲除.已获得缺失了16bp 的可稳定遗传的斑马鱼突变体F3 代纯合子.为了检测突变体与野生型斑马鱼在基因转录水平上的差异,我们对突变体与野生型成体斑马鱼进行了转录组测序.发现突变体斑马鱼比野生型有1200 多个基因发生了上调,1000 多个基因发生了下调.通过功能富集分析发现,这些表达发生变化的基因主要涉及卵巢类固醇合成途径和花生四希酸代谢途径等,暗示斑马鱼cd36基因在脂类代谢调控中发挥作用.进一步的表型检测发现,zcd36 基因敲除斑马鱼胚胎死亡率显著高于野生型斑马鱼;另外,还发现zcd36 基因敲除斑马鱼幼鱼卵黄囊内脂类物质的分解比野生型斑马鱼慢.综合之,本研究构建了cd36 基因TALEN 突变体,并初步揭示了斑马鱼zcd36 基因在脂类物质代谢中的作用,为进一步阐明cd36 调控鱼类脂类代谢的分子机制奠定了基础.
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