【摘 要】
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将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因疫苗分别以200μg、100μg、100μg+100μg猪白介素2真核表达质粒(pcDNA-IL-2)和50μg肌肉注射以及10μg基因枪轰击的方法免疫28日仔猪,并设空载体和生理盐水对照:①取200μg肌肉注射组仔猪15d和30d的血液、胃、肠、肝、脾、肾、心肌、肺脏、注射部位肌肉、脑、腹股沟淋巴结、髂下淋巴结和胰腺等组织器官;②取各组1d、15
【机 构】
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四川农业大学动物科技学院,四川,雅安,625014;动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川,雅安,625014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛
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将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因疫苗分别以200μg、100μg、100μg+100μg猪白介素2真核表达质粒(pcDNA-IL-2)和50μg肌肉注射以及10μg基因枪轰击的方法免疫28日仔猪,并设空载体和生理盐水对照:①取200μg肌肉注射组仔猪15d和30d的血液、胃、肠、肝、脾、肾、心肌、肺脏、注射部位肌肉、脑、腹股沟淋巴结、髂下淋巴结和胰腺等组织器官;②取各组1d、15d、22d、30d、45d、60d、75d、90d、105d和135d血液.PCR检测结果表明于免疫后15d在200μg肌注仔猪血液、胃、肠、肝、脾、肾、心肌、肺脏、注射部位肌肉、脑、腹股沟淋巴结、髂下淋巴结和胰腺中均检测到PRRS基因疫苗;30d可在血液、心肌、注射部位肌肉中检测到基因疫苗.基因疫苗在肌注200μg组仔猪血液中存留105天;在肌注100μg+100μg pcDNA-IL-2组仔猪血液中存留90天;在肌注100μg组仔猪血液中存留75天;在肌注50μg组仔猪血液中存留60天;在基因枪轰击10μg组血液中存留75天.ORF5基因疫苗在血液中存留时间表现出一定的剂量依赖性,pcDNA-IL-2能延长疫苗存留时间.
其他文献
将鸭α干扰素(IFN-α)基因疫苗(pcDNA-SDIFN-α)以每只1、3、6 ug三个剂量基因枪轰击法免疫28日龄鸭,以PBS和空载体质粒pcDNA为对照.各组15 d后接种鸭瘟弱毒疫苗,3 d后开始采血,采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)分别测定鸭外周血中T淋巴细胞转化和CD3+T淋巴细胞数量的动态变化.实验结果显示不同剂量pcDNA-SDIFN-α组均能显著促进外周血
为了获得适宜雏鹅新型病毒性肠炎病毒(NGVEV)生长繁殖的细胞系,本文开展了NGVEV强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)进行适应性培养和增殖特性研究.结果表明:NGVEV强毒株经尿囊腔途径接种10日龄鸭胚4代,取尿囊液接种DEF,F1代无明显细胞病变;F2代于72-96 h在DEF上出现颗粒状缺失、脱落,但无典型蚀斑出现;F3代于96-120h形成大小不等、圆或椭圆形的典型蚀斑;F5代以后NGVEV
根据已发表的细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)NADL-2株全基因序列,设计一对引物用PCR方法扩增出PPV VP2基因,将其连接到pGEM-T载体中,此重组质粒命名为pVP2.对含伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)Min-A株gD、gI、gE、11K全基因,gG、28K基因部分编码区的质粒pPR128进行改造,用StuI和SphI双酶切,切去部分g
根据Genbank上发表的牛肌生成抑制素(MSTN)基因编码序列设计引物,以牛肌细胞总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆到编码肌肉生成抑制素成熟蛋白基因,并经DNA序列测定,产物全长1128bp,编码375氨基酸序列,并经序列分析,与牛MSTN基因序列的同源性高达99％;与猪MSTN基因序列的同源性为94.1％;与鸡MSTN基因序列的同源性为81.7％.
根据GenBank中鸭疫里默氏杆菌(RA)16SrRNA基因序列设计特异性引物,建立了基于16SrRNA鸭疫里默氏杆菌PCR检测方法.建立的PCR方法对鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、鸭源金黄色葡萄球菌、两双歧杆菌、短乳酸杆菌、屎肠球菌和短小芽胞杆菌进行检测,结果只有鸭疫里默氏杆菌DNA能扩增出844bp的特异条带,其他细菌的DNA不能扩增出任何条带;从凝胶条带中回收DNA条带,测序结果与Ge
根据本实验室建立的检测双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,对20日龄樱桃谷鸭经皮下注射途径感染鸭瘟病毒CH强毒株后的消化道内双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的数量变化规律进行了研究.结果表明,正常对照组鸭的消化道中肠球菌数量最多,双歧杆菌次之,芽孢杆菌含量最少;消化道双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌数量在检测期间均比较稳定,无大的波状变化,维持肠道微生态的动态平衡.感染鸭消化道
根据本实验室建立的检测双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,对20日龄樱桃谷鸭经皮下注射途径感染鸭瘟病毒CH强毒株后的呼吸道内双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的数量变化规律进行了研究.结果表明,正常对照组鸭的呼吸道中肠球菌数量最多,双歧杆菌与芽孢杆菌含量基本一致;呼吸道双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌数量在检测期间均比较稳定,无大的波状变化,维持正常菌群的动态平衡.感染鸭呼吸道双
根据本实验室建立的检测双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,对20日龄樱桃谷鸭经口服途径感染鸭瘟病毒CH强毒株后的消化道内双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌的数量变化规律进行了研究.结果表明,正常对照组鸭的消化道中肠球菌数量最多,双歧杆菌次之,芽孢杆菌含量最少;消化道双歧杆菌、芽孢杆菌及肠球菌数量在检测期间均比较稳定,无大的波状变化,维持肠道微生态的动态平衡.感染鸭消化道双歧
利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因,克隆到PMD18-T载体,最后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达.表达的基因工程蛋白分子量大小约37KD,占菌体总蛋白的35％,以包涵体形式存在.利用镍金属螯合介质填料对表达产物进行纯化,经过复性后加入长成单层的鸭胚成纤维细胞(DEF)作用18h,接
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