[目的]本研究旨在建立一株保留猪黄体细胞主要生物学特性和功能的猪黄体细胞系,以期为黄体功能研究提供一个可靠的细胞模型。[方法]采集妊娠6～8 周的健康母猪的卵巢,通过胶原酶消化法和不连续密度梯度离心法获得原代猪黄体细胞后,利用脂质体法将pCI-neo-hTERT 质粒导入原代猪黄体细胞中,经G418 筛选获得阳性克隆细胞；经传代50 代后通过化学染色法、RT-PCR 法对所获得的黄体细胞的生物学功能进行验证；最后,通过RT-PCR 法和ELISA 法检测hTERT 的表达及活性状态,并通过软琼脂克隆实验和裸鼠致瘤实验验证检测所获得的猪黄体细胞是否具有无恶性转化的特性。[结果]转染后50 代的细胞形态正常、并保持较强的生长能力,3β-HSD 活性染色和油红O 染色鉴定发现其阳性率均达95％以上；且保留了原代猪黄体细胞激素合成中的关键基因和受体,及对LH 和PGF2α的应激反应；同时,转染后30 和50 代的猪黄体细胞均表达hTERT 基因且维持较高的生物活性。软琼脂克隆试验和裸鼠致瘤试验显示,转染后第50 代黄体细胞不具有悬浮生长能力和裸鼠致瘤性。[结论]本研究通过将hTERT 基因导入原代猪黄体细胞,建立了永生化的猪黄体细胞,该细胞系保留了原代猪黄体细胞的形态学特征和主要生物学特性。