【摘 要】
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苎麻根腐线虫病是苎麻生产上由短体属咖啡短体线虫(Pratylenchus coffeae)引起的一种主要病害,目前尚无有效防治方法,进行转基因抗病育种是防治苎麻根腐线虫病的有效途径
【机 构】
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湖南农业大学植物保护学院,长沙410128
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苎麻根腐线虫病是苎麻生产上由短体属咖啡短体线虫(Pratylenchus coffeae)引起的一种主要病害,目前尚无有效防治方法,进行转基因抗病育种是防治苎麻根腐线虫病的有效途径.研究表明,unc-87基因对在调节植物线虫运动及线虫繁殖方面具有重要作用.通过RNA干扰使该基因沉默后,线虫出现瘫痪及运动不协调的现象,同时,经处理后线虫人工繁殖率也明显降低.因此,克隆该基因并进行dsRNA植物表达载体的构建,培养转基因苎麻抗病品种,对防治苎麻根腐线虫病具有重要意义.本研究从湖南、江西苎麻地采集的苎麻根周围土壤样品中分离获得P.coffeae,以提取的RNA为模板克隆其unc-87基因.经测序,与P.coffeoe、玉米短体线虫(Pratylenchus zeae)及孢囊线虫(Heterodera glycines)unc-87基因进行比对,同源性分别为98％、87％和80％.运用RNAi原理,向序列中插入限制性内切酶酶切位点Asc Ⅰ、SwaⅠ及Pac Ⅰ、Avr Ⅱ,获得unc-87基因正、反向片段.将片段连接至pFGC5941载体中,获得含有unc-87基因的反向重复dsRNA植物表达载体.将该载体转至农杆菌中侵染苎麻外植体,获得转基因苎麻植株.
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