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目的:土三七为我国常见中药,近年来,服用土三七发生药物性肝脏损伤的病例增多,本研究运用土三七探索其致细胞毒性,明确肝窦内皮细胞损伤是土三七致HSOS发病的早期靶细胞,并揭示线粒体功能不全和氧化/抗氧化系统失衡诱导的细胞凋亡是HSOS发生的关键机制。方法:建立L02细胞-肝窦内皮细胞共培养体系,不同浓度土三七预处理48h后,运用流式细胞术分别检测L02细胞及肝窦内皮细胞凋亡程度。Celltitter lumiscence检测细胞内ATP水平。荧光染色显微镜下观察细胞内线粒体ROS及线粒体膜电位的变化。Western blot检测线粒体抗氧化相关蛋白SOD2以及SIRT3水平,rt-pcr检测两种蛋白的mRNA表达情况。结果:我们发现在15mg/ml的土三七干预下L02细胞的凋亡显著增加,而肝窦内皮细胞在10mg/ml时就已发生显著凋亡,这表示肝窦内皮细胞较L02细胞更易发生损伤。以L02细胞进行进一步线粒体功能检测发现,在5mg/ml浓度的土三七作用下,细胞内ATP水平显著下降,线粒体ROS水平显著增高,线粒体膜电位荧光亮度显著降低。这说明在低浓度药物作用时,细胞还未出现明显凋亡,细胞内线粒体就已发生严重损伤(p<0.01)。SOD2为线粒体内发挥抗氧化功能的蛋白,SIRT3具有去乙酰化的作用,它能够去除SOD2蛋白上的乙酰基而使其发挥抗氧化作用。通过检测SOD2及SIRT3蛋白水平,我们发现SIRT3随药物浓度的增高而减少,SOD2在10mg/ml时少量减少。SIRT3的m RNA表达水平也随药物浓度的增高而降低。结论:肝窦内皮细胞为HSOS发病的早期靶细胞,通过SIRT3-SOD2-mROS发生的线粒体线粒体功能不全是导致细胞凋亡的关键机制。