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【研究背景】野生稻资源是现代水稻育种中新基因的一个重要来源。特别是非AA染色体组野生稻这一次级基因库中有利基因的利用前景更为诱人,野生稻由于长期处于野生状态,经受各种病虫害和不利环境的自然选择,具有丰富的遗传多样性,是天然的基因库。在目前还不能大规模人工创造新基因的条件下,天然的野生稻资源在水稻育种中,特别是抗病虫、抗逆性育种中具有巨大的利用价值。这些优良特性已被广泛用于水稻常规育种和杂交育种中,并取得了巨大的社会效益和经济效益。药用野生稻种子硬,落粒性强,种子繁殖萌发率低。用茎干扦插和分根移栽,成活率低、时间长。本研究采用药用野生稻茎秆作外植体,多种植物激素组合搭配使用进行愈伤诱导培养和分化培养,成功地诱导出了药用野生稻茎秆的愈伤组织,并得到分化生根苗。为今后野生稻的资源保存、利用和杂交育种提供了技术支持和充分保障。【材料与方法】实验材料:药用野生稻材料采集于云南省耿马县。方法:采集的茎秆75%酒精30s和0.1%氯化汞灭菌8 min,清洗,切成0.5cm接入浓度为2,4-D 1.0-10 mg/L培养基上诱导愈伤35d成颗粒,增殖后,接入浓度为6-BA 0.3～8.0 mg/L的培养基上进行分化成小苗,125d完成分化、增殖、继代和壮苗培养。壮苗接入1/2N6浓度为NAA0.1～4.0mg/L的培养基上进行生根培养20d。洗掉根部凝胶,进行苗锻炼和温室培养35d后,移栽至田间管理。愈伤诱导增殖和分化、增殖、继代、壮苗、生根培养基为:N6;添加培养材料为:植物凝胶2.8g/L、蔗糖30g/L,pH值5.8;分化、增殖、继代、壮苗培养添加激素均为:6-BA、NAA 0.5mg/L、ZT2 mg/L、KT3 mg/L;壮苗培养添加TDZ 3.0 mg/L;培养条件为:温度28℃,光照强度3000 lx,光照时间12 h/d。愈伤诱导增殖培养条件为:28℃暗培养。【结果与分析】将0.5cm茎秆接入设置的10组2,4-D愈伤诱导培养基上进行35d培养筛选,结果表明:茎秆在2,4-D浓度为3 mg/L诱导培养基上愈伤出愈率最高,达到45%,愈伤紧实、成颗粒状;当2,4-D浓度为5 mg/L时,愈伤出愈率次之,愈伤增殖速度加快;当2,4-D浓度为10 mg/L时,愈伤出愈率最低,愈伤膨松,褐化严重。从设置的10组2,4-D诱导培养基来看,都可以诱导出愈伤,当2,4-D浓度为1-5 mg/L时,愈伤出愈率随着浓度增高而增高,当2,4-D浓度为6-10mg/L时,愈伤出愈率随着浓度增高而降低。将增殖愈伤接入6-BA浓度为0.3～8.0 mg/L分化培养基上,结果表明:当6-BA浓度为5mg/L时,分化率最好,达到12%,小苗油绿,有丛芽;当6-BA浓度为4mg/L时,用于分化增殖、继代、壮苗最好,小苗增殖速度加快、苗健壮;当6-BA浓度为8mg/L时,分化率最差;在完成分化、增殖、继代、壮苗四个培养过程中,必须与NAA 0.5mg/L、ZT2 mg/L、KT3mg/L;壮苗培养再添加TDZ 3.0 mg/L联合搭配使用,才可能达到较好的分化培养效果;将壮苗接入1/2N6浓度为NAA 0.1～4.0 mg/L的培养基上进行生根培养,结果表明:当NAA浓度为0.5mg/L时,生根率最高达到98%,主根粗,须根发达;当NAA浓度为0.4mg/L时,生根率次之,达到90%;当NAA浓度为4mg/L时,生根率最差,主根、须根曲卷,有大量绒须根;苗锻炼、温室培养,注意控温控水,移栽田间管理,注意水肥管理和病虫害防治。【结论】本实验通过对药用野生稻茎秆培养,筛选出最适宜的激素配比和培养基配方,成功地建立起一套高效高质量的药用野生稻茎秆愈伤诱导、分化、生根培养基的再生体系。突破了野生稻离体保存的关键技术,为野生稻的培育奠定了扎实基础。