高同型半胱氨酸血症(HHcy)是引起包括缺血性心脏病、休克、周围血管疾病等多种心血管疾病的独立危险因子,其发生机制复杂,尚无有效的防治手段。胱硫醚β-合酶(cystathionine β-synthase, CBS)是同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)转硫代谢途径的关键酶,在体内Hcy代谢中发挥重要作用,其基因缺陷或因基因结构异常而导致的酶活性下降是引起血浆Hcy水平升高的重要原因。本课题组前期研究发现,喂饲高甲硫氨酸饮食诱导的高同型半胱氨酸血症模型大鼠体内硝化应激水平升高,硝基化CBS含量增加,同时CBS酶活性降低,可能因此而导致Hcy水平升高,形成恶性循环,从而加剧HHcy的进程。有文献报道,高浓度过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite,ONOO-)在体外可以促使CBS的3个氨基酸残基(W43,W208,Y223)发生硝基化修饰,导致CBS酶失活,但在细胞内是否会发生同样的反应变化尚缺乏迸一步的实验依据。本研究在前期工作基础上,运用体外基因突变的方法,将文献报道的CBS发生硝基化修饰的氨基酸位点进行替换,构建包含突变CBS基因的重组质粒,转入肝细胞,诱导重组基因表达；利用Hcy刺激后,提取细胞蛋白,分析硝基化CBS的含量及其酶活性,以确认肝细胞内CBS硝基化位点。最后将包含突变CBS基因的慢病毒注射入CBS基因敲除鼠大鼠中,观察CBS硝基化及血浆Hcy水平,进一步确认高同型半胱氨酸血症中硝化应激的增强可引起CBS发生硝基化修饰,导致Hcy升高,从而加速高同型半胱氨酸血症的进程。本研究为揭示高同型半胱氨酸血症的发病机制提供了新的思路和实验依据。