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P19CL6细胞是小鼠胚胎性癌细胞P19衍生的细胞系,用含1%DMSO的培养基培养时,该细胞能高效的分化成搏动的心肌细胞,P19CL6细胞是体外研究心肌细胞分化的良好模型。
在本研究中,我们用蛋白质组学的方法寻找P19CL6细胞向心肌细胞分化前后差异表达的蛋白。在DMSO诱导后,我们发现细胞内开始表达肌小节肌球蛋白重链(MHCs)以及3种心肌特异性的转录因子(Csx/Nkx-2.5,GATA-4和MEF2C),这意味着P19CL6细胞能已经分化成为真正的心肌细胞。利用双向电泳、银染、图像分析的方法,我们初步探索了在该分化过程中存在明显改变的差异蛋白。
结果发现了17个差异表达的蛋白点,经过MALDI-TOF-MS和ESI-MS/MS的质谱分析,我们最终鉴定出16个差异表达的蛋白点。对这些差异蛋白的分析结果表明,它们在分化过程中与能量代谢、信号传导、细胞骨架形成等有关。
为了验证分化过程中这些蛋白的表达变化,我们用realtime-PCR的方法对其中6种已知蛋白mRNA水平进行了检测。结果其中只有3个基因的mRNA水平和蛋白水平的丰度一致。此次对P19CL6细胞向心肌细胞分化前后差异表达蛋白的初步探索,可以为我们深入研究DMSO诱导P19CL6细胞向心肌细胞定向分化的调控机制提供线索。