Rapid detection of virus based on immunocapture combining with reverse transcript loop-mediated isot

来源 :中国烟草学会2018年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuanhongsheng1982
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  An immunocapture reverse transcription loop-mediated isothermal amplification(IC-RT-LAMP)for detection of potato virus Y(PVY)and cucumber mosaic virus(CMV)was developed.In this procedure,2 sets of primers were designed to match CMV and PVY specific sequences.The PCR tubes used for this assay were coated with monoclonal antibodies(Mab)specific for PVY and CMV.The concentrations of MgSO4 and dNTP of these two detection systems were adjusted and optimized.The assays are rapid and can be performed in less than 150mins,and the results can be identified through naked eyes.The use of mabs combined with RT-LAMP confers high sensitivity and specificity for virus detection not only in plant tissues,but also in aphids.The detection results with IC-RT-LAMP and RT-PCR was consistent and never less than 96%.The results showed that IC-RT-LAMP allows a rapid detection of CMV and PVY in aphids without RNA isolation steps and the need of thermal cycler.No differences in sensitivity and specificity were detected between IC-RT-LAMP and RT-PCR.
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