论文部分内容阅读
目的鉴定和分析人支气管上皮细胞（HBE）在甲醛染毒和染毒恢复时,诱导型热休克蛋白70（Hsp70）的所有交互作用蛋白,为阐明甲醛暴露条件下Hsp70的生物学作用提供依据。方法用3.3mmol·L-1的甲醛染毒HBE 3 h和染毒3 h后恢复3 h,消化后离心收集细胞,用RIPA裂解液裂解细胞,蛋白定量后调整蛋白浓度为2μg·μ-1。先在细胞裂解物中加30μl琼脂糖蛋白A/G预清除,然后加3μl小鼠抗人Hsp70抗体4℃摇动孵育过夜,再加30μl琼脂糖蛋白A/G 4℃旋转孵育1 h,用RIPA清洗3次,最后加1×SDS煮沸变性蛋白。用SDS-PAGE分离蛋白样本后,运用质谱技术鉴定蛋白,通过查询数据库和文献资料,根据功能对鉴定的蛋白进行分类。结果甲醛染毒阶段的Hsp70交互作用蛋白经过鉴定共有41种,分别为:ANXA2、核糖体蛋白s3、谷胱甘肽S-转移酶P、核糖体蛋白S3a、膜联蛋白A3、14-3-3蛋白、E3泛素蛋白连接酶RNF12、钙蛋白酶、核糖体蛋白L19、酸性核糖体蛋白P0、核糖体蛋白L7、核糖体蛋白L14、不均一核内核蛋白A2B1、核糖体蛋白L7a、核糖体蛋白S8等,根据功能分为13类;甲醛染毒恢复阶段的Hsp70交互作用蛋白经过鉴定共有55种,分别为:过氧化还原酶1、KIN17、谷胱甘肽S-转移酶P、半乳糖凝集素7、包含锚蛋白重复区域蛋白32、泛素蛋白连接酶CBL、磷酸酯酶和肌动蛋白的调节子2、E3泛素蛋白连接酶、cAMP调节的磷蛋白21、磷脂酰4磷酸盐3激酶、RNA外切酶1、核糖体蛋白L7等,根据功能分为20类。其中既有具有正常生理功能的蛋白,如骨架蛋白、糖和能量代谢蛋白、细胞连接蛋白等,也有具有抵抗损伤促进修复功能的蛋白,如抵抗氧化性损伤蛋白、毒物代谢解毒蛋白、DNA修复蛋白等。结论在甲醛染毒和染毒恢复阶段,Hsp70可能通过和特定蛋白的交互作用而在加速甲醛代谢解毒、减小甲醛导致的生物学损伤、促进变性蛋白和损伤DNA的修复方面发挥了一定的作用。