【摘 要】
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以花育25(Arachis hypogaea L.)植株总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,获得大约1 000 bp的条带.将该片段克隆到pMD19-T simple vector载体上,经测序表明,该序列全长967 bp,含一个开放阅读框(ORF),编码一个由318个氨基酸残基组成的蛋白质.在线软件预测该蛋白质的分子量为37.9kD,理论等电点为6.65,碱性氨基酸(Lys+Arg)占8.9％
【机 构】
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青岛农业大学农学与植物保护学院,青岛266109 山东省花生研究所,青岛266110
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以花育25(Arachis hypogaea L.)植株总RNA为模板,通过RT-PCR扩增,获得大约1 000 bp的条带.将该片段克隆到pMD19-T simple vector载体上,经测序表明,该序列全长967 bp,含一个开放阅读框(ORF),编码一个由318个氨基酸残基组成的蛋白质.在线软件预测该蛋白质的分子量为37.9kD,理论等电点为6.65,碱性氨基酸(Lys+Arg)占8.9％,酸性氨基酸(Asp+Glu)占9.3％,亮氨酸比例最高(12.8％)；不稳定系数为39.10,说明该蛋白为稳定蛋白.将该cDNA及其推导的氨基酸序列在NCBI网站上进行Blast比对,表明该及其推导的氨基酸序列与已报道的PGIP基因及其推导的氨基酸的序列同源性最高.分析结果表明,所克隆片段为花生的PGIP基因,命名为ApPGIP1,并提交给GenBank.蛋白质疏水性分析表明,该蛋白N端有一明显的疏水区,采用神经网络方法预测蛋白质信号肽表明,ApPGIP1信号肽为N端的26个氨基酸残基,这与疏水性分析结果相一致.序列分析结果还表明,ApPGIP1成熟肽氨基酸序列中具有4个潜在的N-糖基化位点,N端和C端各有4个参与二硫键形成的半胱氨酸残基,亚细胞定位分析表明,该蛋白属于胞外蛋白.ApPGIP1三级结构预测结果表明,由ApPGIP1肽链构建的三维模型含9个α-螺旋和21个β-折叠,主体结构由9个串联的LRRs基序组成；ApPGIP1氨基酸序列从第74个氨基酸开始的LRRs基序均具有"LxxLxLxxNxLS/TGxIPxxLxxL"(x代表任意氨基酸残基)这样的共有序列,除个别替换、插入或缺失外,序列高度保守.
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