【摘 要】
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目的 探讨人外周血单核细胞向肝样细胞的潜能及单核细胞衍生的肝样细胞移植受体鼠肝组织过程中的有效示踪剂,并进一步观察移植后的肝样细胞存活,分布与转归情况.方法 分
【出 处】
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中华医学会2012年第十三届中华肝胆胰脾外科专业学术论坛
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目的 探讨人外周血单核细胞向肝样细胞的潜能及单核细胞衍生的肝样细胞移植受体鼠肝组织过程中的有效示踪剂,并进一步观察移植后的肝样细胞存活,分布与转归情况.方法 分别设立A,B两组.A组为阴性对照组,在细胞培养过程中不添加细胞分化诱导因子HGF和FGF-4；B组应用HGF和FGF-4体外联合诱导人外周血单核细胞向肝干细胞分化.鉴定和判断细胞分化的变化,采用免疫荧光细胞化学染色法检测细胞甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)和细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)表达.以红色荧光染料PKH26标记单核细胞衍生的肝样细胞,尾静脉注入受体鼠体内作为实验组.对照组注射等量生理盐水,分别于移植2周后取肝组织,通过荧光显微镜观察实验组肝样细胞向肝脏迁移与转归的情况.采用免疫荧光细胞化学染色法检测移植的肝样细胞白蛋白(albumin,ALB)的表达.结果 A组细胞随培养时间延长由刚分离出的单核细胞呈较均一的圆形逐渐变得不规则,呈条索状,纤维样改变,少部分细胞呈圆形,细胞发生凋亡,裂解；B组细胞随诱导分化培养时间延长,细胞变大,变圆,呈集落生长,增殖活性强.免疫荧光细胞化学染色法检测B组有AFP和CK19阳性表达,而A组则没有表达.动物实验组受体鼠肝组织冰冻切片中可见大量PKH26标记阳性的肝样细胞,动物实验对照组受体鼠肝组织冰冻切片中未发现PKH26标记阳性的肝样细胞.移植2周后行免疫荧光细胞化学染色法检测实验组肝样细胞ALB表达阳性.结论 在HGF和FGF-4体外联合诱导条件下,人外周血单核细胞具有向肝样细胞分化的潜能.并且,PKH26可作为肝样细胞移植的一种有效示踪剂.移居肝组织的肝样细胞2周后开始向成熟肝细胞分化,发挥肝细胞功能,表达白蛋白.
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