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目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)对肺单核细胞炎性相关细胞因子的调控作用以及调控机制;研究通过阻断血管内皮生长因子受体1(VEGF-R1)对改变肺炎性反应(LIR)进程,减轻急性肺损伤(ALI)的影响.方法:1.健康SD雄性大鼠3％戊巴比妥麻醉后提取肺泡灌洗液中单核细胞,细胞免疫荧光染色F4/80,激光共聚焦观察单核细胞.同样方法细胞培养2h后,按不同的处理方式将细胞随机分为6组(每组n=10):N组(none),LPS组(脂多糖LPS 100ug/ml),0.05V组(VEGF 0.05ng/ml),5V组(VEGF5ng/ml),LPS+0.05V组(LPS 100ug/ml+VEGF 0.05ng/ml),LPS+5V组(LPS 100ug/ml+VEGF 5ng/ml),处理24小时后,取上清液ELISA测定TNF-α;取细胞测定IL-6/IL-8/TNF-α/IL-4/IL-10/VEGF-R1 mRNA表达;取细胞Western Blot测定VEGF-R1的表达.同样方法提取单核细胞,培养后将细胞随机分为3组:N(none)组,LPS组(100ug/ml),TNF-a组(500ug/ml),细胞免疫荧光染色VEGF-R1,激光共聚焦观察VEGF-R1的表达以及确定单核细胞被激活.2.健康SPF级C57雄性小鼠3％戊巴比妥麻醉后提取肺泡灌洗液中单核细胞,细胞培养2h后,按不同的处理方式将细胞随机分为6组(每组n=12):N组(none),LPS组(LPS 100ug/ml),VEGF组(VEGF 5ng/ml),Blockade组(VEGF-R1 Blocker 8ug/ml),LPS+Blockade组(LPS 100ug/ml+VEGF-R1 Blocker 8ug/ml),LPS+Blockade+VEGF组(LPS 100ug/ml+VEGF-R1 Blocker 8ug/ml+VEGF 5ng/ml),处理24小时后,取细胞测定IL-6/TNF-a/IL-4/IL-10 mRNA表达.结果:(1)大鼠肺单核细胞染色:确定了单核细胞的纯化.(2)不同浓度VEGF刺激大鼠肺单核细胞分泌炎性细胞因子mRNA的含量:LPS组与N组比较TNF-α,IL-6,IL-8,IL-10 mRNA的含量均显著升高(P＜0.001);LPS+5V组的TNF-α mRNA含量明显高于LPS组(P＜0.05);与LPS+0.05V组比较,LPS+5V组的TNF-α mRNA含量明显升高(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+5V组IL-10/TNF-α比率降低(P＜0.05);与LPS+0.05V组比较,LPS+5V组IL-10/TNF-α比率也降低(P＜0.05).与N组比较,其余各组IL-10/IL-6比率均降低(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+5V组IL-10/IL-6比率降低(P＜0.05);与LPS+0.05V组比较,LPS+5V组IL-10/IL-6比率同样也降低(P＜0.05).(3)不同浓度VEGF刺激大鼠肺泡灌洗液炎性细胞因子TNF-α的含量(pg/ml):与N组、0.05V组、5V组分别比较,LPS组的TNF-α含量(pg/ml)均显著升高(P＜0.05).(4)不同刺激下肺单核细胞VEGFR1的表达:大鼠肺单核细胞表面丰富表达VEGF-R1.当LPS刺激时,肺单核细胞被激活,胞体呈梭形或椭圆形,胞膜不规则,边缘有毛刺,毛刺呈放射状紧紧贴壁,胞浆有空泡,胞核形态不一,LPS能够导致VEGF-R1显著上调.(5)大鼠肺单核细胞VEGF-R1蛋白的表达:LPS组和N组比较,VEGF-R1的蛋白表达增加,VEGF-R1光密度/GAPDH升高(P＜0.05).(6)大鼠肺单核细胞VEGF-R1与TNF-α表达的关系:VEGF-R1与TNF-α呈正相关,而VEGF-R1与IL-4呈负相关,VEGF-R1与IL-10也呈负相关.(7)阻断VEGF-R1后小鼠肺单核细胞分泌炎性细胞因子mRNA的含量:与N组比较,LPS组TNF-a mRNA的表达明显升高(P＜0.05);LPS+Block组TNF-a mRNA的表达与LPS组比较,明显降低(P＜0.05);LPS+Block+V组与LPS+Block组比较,TNF-a mRNA的表达又进一步升高(P＜0.001);LPS组与N组比较IL-6 mRNA的表达明显升高(P＜0.05);LPS+Block+V组与LPS+Block组比较,IL-6 mRNA的表达又进一步升高(P＜0.05).LPS组与N组比较,IL-10/TNF-a比率明显降低(P＜0.05);LPS+Block组与LPS组比较,IL-10/TNF-a比率明显升高(P＜0.05);LPS组与N组比较,IL-10/IL-6比率明显降低(P＜0.001);LPS+Block组与LPS组比较,IL-10/IL-6比率进一步升高(P＜0.05).结论:LPS可以激活肺单核细胞产生炎性反应,而高浓度的VEGF可以通过VEGF-R1介导上调LPS导致的这种炎性反应,从而在LIR中起到了促炎的作用,阻断VEGF-R1,可以抑制这种由LPS导致的炎性反应.