成人牙髓SP细胞体外多向分化能力检测

来源 :广东省口腔医学会第三次会员代表大会暨第十次学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tingchao12
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  目的:通过流式分选得到人牙髓SP及MP细胞,并进行体外多向分化(成牙本质/成骨,成脂,成神经,成血管内皮)诱导,观察牙髓SP细胞是否具有良好的多向分化潜能.方法:通过流式细胞仪分离获得牙髓SP和MP细胞.体外诱导牙髓SP和MP细胞向成牙本质/成骨分化,诱导14 d后,茜素红染色观察矿化基质的形成.荧光定量RT-PCR检测成牙本质/成骨标志基因DSPP,DMP-1的表达.体外诱导牙髓SP和MP细胞向成脂分化,培养21 d后,油红O染色.荧光定量RT-PCR检测成脂标志基因PPARγ2与LPL表达.体外诱导牙髓SP和MP细胞神经分化,诱导培养4d后,细胞免疫荧光法检测NSE表达.荧光定量RT-PCR检测神经细胞标志基因NSE和NEF的表达.体外诱导牙髓SP和MP细胞向血管内皮分化,分化培养7天的细胞进行Matrivgel管状形成试验,荧光定量RT-PCR检测内皮细胞标志基因υWF、CD31的表达.结果:成牙本质/成骨诱导:茜素红染色显示SP细胞诱导2周后形成的矿化基质较MP细胞多,相关基因DSPP与DMP-1的表达量SP细胞明显高于MP细胞(P<0.01).成脂诱导分化:油红O染色显示SP细胞诱导3周后形成细胞内脂滴较MP细胞大且多,相关基因PPARγ2与LPL的表达量SP细胞明显高于MP细胞(P<0.01).成神经诱导分化:诱导2d后SP细胞发生极化,细胞突起形成,诱导4d后免疫荧光染色显示SP细胞NSE呈强阳性,MP细胞表达阴性.成神经诱导后相关基因NSE与NEF的表达量SP细胞明显高于MP细胞(P<0.01).成血管内皮诱导分化:诱导7d后SP细胞在Matrivgel胶上形成二维网状结构,MP细胞未见成管.成血管内皮诱导后相关基因vWF与CD31的表达量SP细胞明显高于MP细胞(P<0.01).结论:人牙髓SP细胞在体外具备成牙本质/成骨、成脂、成神经和成内皮的多向分化潜能,有望成为组织工程新的种子细胞.
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