【摘 要】
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WNK4(WNKlysinedeficientproteinkinase4)基因是一个新近分离克隆的蛋白激酶基因,可调节多种离子转运。阐明WNK4基因的转录及转录后调节具有重要意义。乙酰化在多种基因的表达调控中发挥重要作用,两类作用相反的酶,组蛋白乙酰转移酶(HAT)利组蛋白去乙酰化酶(HDAC)参与调节蛋白质乙酰化状态。曲古抑菌素A(TSA)能够特异性抑制HDAC
【出 处】
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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编
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WNK4(WNKlysinedeficientproteinkinase4)基因是一个新近分离克隆的蛋白激酶基因,可调节多种离子转运。阐明WNK4基因的转录及转录后调节具有重要意义。乙酰化在多种基因的表达调控中发挥重要作用,两类作用相反的酶,组蛋白乙酰转移酶(HAT)利组蛋白去乙酰化酶(HDAC)参与调节蛋白质乙酰化状态。曲古抑菌素A(TSA)能够特异性抑制HDAC活性从而引起组蛋白和一些转录相关因子的乙酰化。本研究以曲古抑菌素A(TSA)作为乙酰化的诱导因素,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(Real-timeRT-PCR)和蛋白印迹法检测WNK4的mRNA和蛋白表达水平,结果表明在TSA刺激24h后,mRNA和蛋白表达水平呈一定程度性增加。随后根据启动子序列分析和TRANSFAC-TESS及Match~(TM)反应元件的预测软件,寻找到受乙酰化调控的转录因子结合位点,即GATA-1结合位点。应用电泳泳动迁移实验(electrophoreticmobilityshiftassay)的方法鉴定这个反应元件,构建含有突变或缺失的GATA-1反应元件的萤光素酶报告基因载体,并用荧光素酶活性的方法检测其在乙酰化诱导的WNK4启动子转录激活中的作用。结果表明含有野生型GATA-1位点的启动子具有高转录活性,而该位点的突变或缺失载体显著降低启动子活性,提示了该元件在WNK4启动子转录激活中发挥重要调控作用。综上,本研究鉴定了WNK4启动子内GATA-1反应元件,证实其在TSA对启动子活性调节中的作用,并推测这有可能是乙酰化对WNK4基因表达调控的一种机制。
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