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凝集素是一类能够与特异性糖基相结合的蛋白质,被称作糖基解码器,广泛存在于植物、动物和微生物个体中。真菌凝集素因其多样的生物学活性,被广泛的应用于科研工作中。我们首先制备了N-乙酰葡萄糖胺偶联的Sepharose-6B基质,利用一步亲和层析法从杨树菇总蛋白中纯化得到一种新的杨树菇凝集素AAL-2。我们将AAL-2做胶内酶解,通过质谱分析得到6段小肽的氨基酸序列,同时利用高通量RNA测序技术构建了杨树菇转录组,然后将6段小肽与转录组比对分析,得到一段可能编码AAL-2的编码区。进一步分析发现,AAL-2预测的蛋白质分子量为43.175 kDa,与我们用质谱分析得到的蛋白质分子量完全一致,由此确定该编码区即为AAL-2的编码序列。接下来我们选取与AAL-2同源度较高的凝集素PVL为模板,通过同源模建的方法构建了AAL-2的3维模型,并模拟了AAL-2和N-乙酰葡萄糖胺的复合体模型。AAL-2的3维模型揭示了AAL-2共有28个β折叠片层,并以4个β折叠片层为一组,形成7个β折叠组,两个连续的β折叠组之间的空隙即为潜在的糖结合结构域。在复合体模型中,配体N-乙酰葡萄糖胺结合在相邻两个β折叠组的中间,而该糖结合结构域中3个疏水芳香残基形成的疏水腔及配体与氨基酸残基之间形成的5个氢键增强了N-乙酰葡萄糖胺与AAL-2的结合能力。为了更好的鉴定AAL-2的糖结合特异性及糖结合特性,我们分别运用糖芯片技术和等温滴定量热技术对AAL-2做了进一步分析鉴定。在糖芯片试验中,AAL-2对N-乙酰葡萄糖胺为末端的糖基具有高度的亲和性,如果该末端的N-乙酰葡萄糖胺进一步结合半乳糖形成N-乙酰乳糖胺,会进一步增强AAL-2与该糖基的结合能力;我们使用等温滴定量热仪分析了AAL-2与N-乙酰葡萄糖胺结合的热力学常数,结果显示N-乙酰葡萄糖胺以顺序结合位点的模式结合到AAL-2的糖结合结构域中,即是说N-乙酰葡萄糖胺结合到AAL-2蛋白的一个糖结合位点后,会影响下一个糖结合位点结合N-乙酰葡萄糖胺的能力。