转录因子c-jun对胃癌SGC7901细胞中β3Gn-T8基因的表达调控作用

来源 :华东六省一市生物化学与分子生物学学会2012年学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:galatea
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  目的:明确转录因子c-jun对胃癌SGC7901细胞中β3Gn-T8基因的表达调控作用。方法:利用转录因子数据库在线预测β3Gn-T8 promoter区与转录因子c-jun结合位点;根据生物信息学的预测结果,采用PCR法从胃癌SGC7901细胞基因组DNA中克隆β3Gn-T8基因启动子区段:-1449/+ 107、-947/+107、-760/+107、-561/+ 107、-503/+ 107、-393/+107、-248/+107、-561/+8和-561/+8mutation (-160/-154),构建萤火虫荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-luc(-1449/+ 107)、pGL3-luc(-947/+107)、pGL3-luc(-760/+107)、pGL3-luc(-561/+107)、pGL3-luc(-503/+107)、pGL3-luc(-393/+ 107)和pGL3-luc(-248/+ 107) pGL3-luc (-561/+8)和pGL3-luc(-561/+8mutation):将β3Gn-T8启动子区报告基因表达载体与内参照质粒pRL-SV40和转录因子表达载体pCI-neo-jun共转染胃癌SGC7901细胞,采用双荧光素酶报告基因分析技术检测转录因子c-jun对β3GnT8基因启动子区的转录激活作用;并进一步采用染色质免疫沉淀(Chip)技术检测c-jun蛋白和β3Gn-T8基因DNA的结合作用。结果:β3Gn-T8启动子区存在着转录因子c-jun的多个结合位点;c-jun对其具有转录激活作用,pGL3-luc(-561/+8)荧光素酶活性最高,且对c-jun呈剂量依赖性;chip结果显示c-jun蛋白结合至β3Gn-T8基因DNA片段。结论:转录因子c-jun参与胃癌SGC7901细胞中β3Gn-T8基因的表达调控。
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