水稻条纹病毒的亚基因组表达调控的研究

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水稻条纹叶枯病,俗称水稻癌症,在生产中造成的损失严重。引起该病的病原是水稻条纹病毒。水稻条纹病毒(Ricestripe tenuivirus,RSV),是一种负单链RNA病毒(-ssRNA),为纤细病毒属的模式种,自然界中主要通过灰飞虱传播。RSV基因组由4条RNA链组成,R1链负义编码RdRp蛋白,其他3条链采用双义编码策略编码6个蛋白,病毒链与病毒互补链分别产生共5’末端的亚基因组。笔者针对亚基因组的表达调控展开研究。本研究通过RACE技术,完成RSV亚基因组NSvc2-sgRNA、NS3-sgRNA、CP-sgRNA末端定位。通过萤火虫荧光素酶(Fluc)载体的体外翻译分析,Fluc读数结果显示单独亚基因组CP-5U的存在对翻译起正调控作用,单独亚基因组CP-3U的存在对翻译起抑制作用,亚基因组的5U和3U同时存在对翻译有更大的提高作用。表明5U与3U可能存在互作对翻译起正调控作用。在外翻译系统中以VCR3和cp-sgRNA为模板在加帽和不加帽的情况下分别来表达CP蛋白,通过同位素35S放射自显影的方法检测蛋白表达量,实验结果表明RSV共5′末端亚基因组能够提高病毒CP蛋白表达量,暗示了共5′末端亚基因组的产生的生物学意义及对病毒蛋白表达的必要性。
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