【摘 要】
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采用RT-PCR的方法利用肝组织提取的总RNA制备猪胰岛素样生长因子Ⅰ(pIGF-Ⅰ)cDNA目的片断,与pMD-18Tvector连接成重组质粒,并转化EscherichiacoliDH5α.联合应用PCR鉴定、α
【机 构】
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吉林大学,实验动物中心,吉林,长春,130062
【出 处】
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中国农业生物技术学会动物生物技术分会第二届全国动物生物技术学术研讨会
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采用RT-PCR的方法利用肝组织提取的总RNA制备猪胰岛素样生长因子Ⅰ(pIGF-Ⅰ)cDNA目的片断,与pMD-18Tvector连接成重组质粒,并转化EscherichiacoliDH5α.联合应用PCR鉴定、α互补法、限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性.测定纯化的重组质粒A260,确定浓度并以此制备实时荧光定量PCR(FQ-PCR)梯度浓度参考标准.结果表明:pIGF-ⅠcDNA目的片断成功制备,并获得稳定的重组质粒,保持了目的片断序列的特异性和完整性,成功构建了pIGF-Ⅰ实时FQ-PCR的定量参考标准.
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